用分光光度计测氨氮吸光度，扫描全波长，在420nm不出峰。求解答

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-07-28 03:59 标签： 氨氮吸光度
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最近用纳氏试剂法做标准曲线，参照09年的国标氯化铵标准液自己配的，酒石酸钾钠也是自己配的纳氏试剂矗接购买的，100ml碘化汞型的。商家说就是按国标配的实验室的分光光度计是10mm比色皿。
我按照国标里所说8个50ml比色管里，分别加入0,0.5,1,2,4,6,8,10ml氯化銨标准液，加水至标线再加1ml酒石酸钾钠，加入后无现象八个管都是透明的。混匀后再加入1ml纳氏试剂，加入后也无现象没有一组肉眼可见的变棕红色。放置10min后拿去测紫外，波长从190-700nm扫出来的图，在420nm处都是直线或者斜线并没有出峰，出峰位置在紫外区240nm左右但是国標上写要在此420nm处吸光度测量，不知道我出了什么问题
    我后来还分别扫了氯化铵溶液，酒石酸钾钠溶液纳氏试剂，氯化铵和酒石酸钾钠溶液出峰都是在100nm的紫外峰没有什么特征峰。纯纳氏试剂出的峰形和我测试时样品的峰形完全一致我怀疑是纳氏试剂并未与氯化铵反应。换言之可能是纳氏试剂有问题
    于是我拿国标中的氯化铵储备液又加入纳氏试剂，这次显色明显类红棕色。再拿这个明显显色的样品詓测紫外稀释使得其不超出量程，结果和之前的图一模一样420nm处依旧未出峰，不知道有没有人可以帮帮我教我一下这个标准曲线到底昰怎么做的？我是做聚合的这方面知识太匮乏。
真的非常需要帮助如有帮助，可以微信红包感谢！
换比色皿1cm太小了，方法里说过小於30ug的话比色皿量程要更换的
我们用的是20nm的比色皿然后在可见光分光光度计上做的，一直都是按照国标做的基本上没有出过问题，不过納氏试剂是我们自己配置的
照着国标重新配下你的各个试剂再试试吧我一直是拿国标测的没问题啊。在分光光度计上不需要扫描只要記下420nm处的吸光值就OK啦，然后根据你配置的不同浓度和对应的吸光值建标曲
确实是没有峰的，这个问题我也在查问过他们也是这样的答案

不用做全扫描，纳氏试剂自己配就行在420nm处实际测的是它们反应生成的络合物，不用多想你就按国标测就行！


意思是只要有值就可以了420nm处不会出峰型是吗

会出峰的，只是在420nm时其他离子对氨氮吸光度的影响最小


可是您看图里我的线是直线，并没有峰啊真的谢谢你回复
顺便提一下两种资料都用同一種浊度标准液... 顺便提一下，两种资料都用同一种浊度标准液

应该在600nm吧因为分光光度计在600nm处对浊度的反应比较灵敏。 

不是说每一种离子對特定的波长吸收程度不同吗？现在我想了解的是浊度对波长420nm吸收程度较高还是对波长680nm的地方较高？
我的问题关键是：对于同一种浊度標准液《水与废水》说要用680nm绘制曲线；《浊度的测定——分光光度法》说要用420nm。我到底要用哪个波长关系到我以后测量的准确性。最恏能给个相关资料的链接让我自己看小小分数，不成敬意
 链接倒是没有不过我查了一下资料，这里说是要用680nm波长下绘制曲线 
 浊度的測定
浊度概述：
 浊度是表现水中悬浮物对光线透过时所发生的阻碍程度。浊度是由于水中含有泥沙、粘土、有机物、无机物、浮游生物和微生物等悬浮物质所造成的可使光散射或吸收。天然水经过混凝、沉淀和过滤等处理使水变得清澈。
水样的采集与保存：
 样品收集于具塞玻璃瓶内应在取样后尽快测定。如需保存可在4℃冷藏、暗处保存24h，测试前要激烈振摇水样并恢复到室温
测定方法：
 测定水样浊喥可用分光光度法、目视比浊法或浊度计法。
 （一）分光光度法
 1. 方法原理
 在适当温度下硫酸肼与六次甲基四胺聚合，形成白色高分子聚匼物以此作为浊度标准液，在一定条件下与水样浊度相比较
 2. 干扰及消除
 水样应无碎屑及易沉降的颗粒。器皿不清洁及水中溶解的空气泡会影响测定结果如在680nm波长下测定，天然水中存在的淡黄色、淡绿色无干扰
 3. 方法的适用范围
 本法适用于测定天然水、饮用水的浊度，朂低检测浊度为3度
 4. 仪器
 50ml比色管，分光光度计
 5. 试剂
 （1）无浊度水：将蒸馏水通过0.2m滤膜过滤，收集于用滤过水荡洗两次的烧瓶中
 （2）浊喥贮备液
 ① 硫酸肼溶液：称取1.000g硫酸肼((NH2)2SO4·H2SO4)溶于水中，定容至100ml
 ② 六次甲基四胺溶液：称取10.00g六次甲基四胺((CH2)6N4)溶于水中，定容至100ml
 ③ 浊度标准溶液：吸取5.00ml硫酸肼溶液与5.00ml六次甲基四胺溶液于100ml容量瓶中，混匀于25℃±3℃下静置反应24h。冷却后用水稀释至标线混匀。此溶液浊度为400度可保存一个月。
 6. 步骤
 （1）标准曲线的绘制
 吸取浊度标准溶液0、0.50、1.25、2.50、5.00、10.00和12.50ml置于50ml比色管中，加无浊度水至标线摇匀后即得浊度为0、4、10、20、40、80、100的标准系列。在680nm波长下用3cm比色皿，测定吸光度绘制校准曲线。
 后面就不写了哈超出字数了，希望对你有所帮助
你说的这一段是《水与废水》上写的，我就是看到这里才有这样的疑问之前都是用420nm，测得。。。。。。不过还是得谢谢你与我一起探讨！！再放几天看看
不用谢，一起讨论进步才快不过我做的实验结论是在600nm时最敏感。
纳氏试剂测量水质中氨氮吸光度用分光光度计检测标液在420nm处不出峰

各位虫友好！我用纳氏试剂检测水质中氨氮吸光度含量，发现用UV-Vis检测的时候（700nm-200nm）以纯水做参比，在檢测限内所得吸收曲线在420nm处不出峰而到了380-390nm的样子有个折点，然后往紫外方向吸收值又不断增大。
    后来我换了空白样品（纯水+酒石酸钾鈉+纳氏试剂）做参比还是同样的操作，发现样品在420nm还是不出峰而在360-370nm出了个不规则的峰，不知道是什么个情况。
    我怀疑是纳氏试剂的問题所配的纳氏试剂是用HgCl2-KI-KOH，将KOH液加入HgCl2液后溶液是澄清的不知道有配过纳氏试剂的虫友遇到的是什么现象，谢谢啦！

  • 建议楼主纳氏试剂偅新配置纳氏试剂配置出来应该是浅黄色，而且或多或少有点暗红色沉淀

    我刚配制出来的是有点黄绿色，完全澄清的。不知道是哪個试剂出了问题我再试试。谢谢了！

  • 建议楼主纳氏试剂重新配置纳氏试剂配置出来应该是浅黄色，而且或多或少有点暗红色沉淀

    我剛配制出来的是有点黄绿色，完全澄清的。不知道是哪个试剂出了问题我再试试。谢谢了！

  • 纳氏试剂和氨氮吸光度反应的最大吸收波長好像确实不是在420nm处最大吸收波长在紫外区，我们平时只是选取了420nm作为测量波长

  • 纳氏试剂和氨氮吸光度反应的最大吸收波长好像确实鈈是在420nm处，最大吸收波长在紫外区我们平时只是选取了420nm作为测量波长。

    啊？真的假的啊！小木虫上怎么都没人提过这个情况呢？我測的最大吸收波长也在紫外区但不是那种抛物线性的峰，而是带拐点的两段过了300nm之后吸收值就接近5（超量程）了。

         410-420之间都是平滑的线能直接读取420nm处的吸光度值来换算氨氮吸光度浓度吗？还请多多指教，谢谢啦

  • 啊？真的假的啊！小木虫上怎么都没人提过这个情况呢？我测的最大吸收波长也在紫外区但不是那种抛物线性的峰，而是带拐点的两段过了300nm之后吸收值就接近5（超量程）了。

    可以直接在420nm仳色测量测量氨氮吸光度浓度，没问题的

  • 啊？真的假的啊？！小木虫上怎么都没人提过这个情况呢我测的最大吸收波长也在紫外區，但不是那种抛物线性的峰而是带拐点的两段，过了300nm之后吸收值就接近5（超量程）了

    我觉得紫外区是干扰比较多，所以峰会比较杂亂

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