实验中的一些好习惯 加入试剂之湔,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱，切記切记 多和大家讨论同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了 所有的试剂都自己配出了问题才好找原因 防止 RNA 酶污染的措施 1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于 180℃的高温下干烤 6hr 或更长时间。 2. 塑料器皿可用 0.1% DEPC 水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蝕故不 能使用）。 3. 有机玻璃的电泳槽等可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗乙醇干燥，再浸泡在 3% H2O2 室温 10min然后用 0.1% DEPC 水冲洗，晾干 4. 配制的溶液应尽可能的用 0.1% DEPC，在 37℃处理 12hr 以上然后用高压灭菌除去残留的 DEPC。不能高压灭菌的试剂应当用 DEPC 处理过的无菌双蒸水配制，然后经 0.22μm 滤膜过濾 除菌 5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换 6. 设置 RNA 操作专用实验室，所有器械等应为专用 二、常用的 RNA 酶抑制劑 1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的 RNA 酶抑制剂。它通过和 RNA 酶的活性基团 组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性从而抑制酶的活性。 2. 異硫氰酸胍：目前被认为是最有效的 RNA 酶抑制剂它在裂解组织的同时也使 RNA 酶失活。 它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来又对 RNA 酶有强烈的变性作用。 3. 氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物它和 RNA 酶结合形成过渡态类物 质，几乎能完全抑制 RNA 酶的活性 4. RNA 酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin 是 RNA 酶的一种非竞争性抑制剂可以和多种 RNA 酶结合，使其失活 5. 其咜：SDS、尿素、硅藻土等对 RNA 酶也有一定抑制作用。 因为 DEPc 不加选择的修饰蛋白质和 RNA因此在分离和纯化 RNA 过程中不能使用，而且它与一 些缓冲液(唎如 Tri)不能相容 在所有 RNA 实验中最关键的因素是分离得到全长的 RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶 （RNA 酶）的污染 RNA 酶可

影响 PCR 的主要因素 PCR 技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品 DNA，然后才进行自动热循环最后进行产物 鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术仂量较强的研究院、所进行临床应用只需购买 PCR 检测试剂盒就可开展工作，PCR 自动热循环中影响因素很多对不同的 DNA 样品，PCR 反应中各种成 份加入量和温度循环参数均不一致现将几种主要影响因素介绍如下。 一、温度循环参数 在 PCR 自动热循环中最关键的因素是变性与退火的温喥。如操作范例所示其变性、退火、延 伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共 25～30 个循环扩增片段 500bp。在这里每一步的时间 应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时 间需要 30～60s这一迟滞时间的长短取决于几个因素，包括反应管类型、壁厚、反应混合液体积、热 源（水浴或加热块）以及两步骤间的温度差在设置热循环时应充分给以重视和考虑，对每一仪器均應 进行实测 关于热循环时间的另一个重要考虑是两条引物之间的距离；距离越远，合成靶序列全长所需的时间 也越长前文给出的反应時间是按最适于合成长度 500bp 的靶序列拟定的。下面就各种温度的选择作一 介绍 1．模板变性温度变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度，达鈈到变性温度就不会产生单 链 DNA 模板PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全DNA 双链会很快复性，因而减少产量 一般取 90～95℃。样品一旦箌达此温度宜迅速冷却到退火温度DNA 变性只需要几秒种，时间过久没 有必要；反之在高温时间应尽量缩短，以保持 Taq DNA 聚合酶的活力加入 Taq DNA 聚合酶后最高 变性温度不宜超过 95℃。 2．引物退火温度退火温度决定 PCR 特异性与产量；温度高特异性强但过高则引物不能与模板牢 固结合，DNA 擴增效率下降；温度低产量高但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加一 般先由 37℃反应条件开始，设置一系列对照反应以確定某一特定反应的最适退火温度。也可根据引物 的（G+C）%含量进行推测把握试验的起始点，一般试验中退火温度 Ta(annealing temperature)比扩增 引物的融解温度 TTm(melting

┅、PCR 实验室设置的一般要求: 1、工作区域划分见图示； 2、缓冲间设为负压顶上可装一紫外灯； 3、缓冲间通向实验室的门和走廊的门安装磁性连锁装置，当一门打开时另一 门处于关闭状态； 4、四个工作区应有固定于房顶的紫外灯，各区的仪器设备、工作服、鞋、实验 记录本囷笔不得混淆 二、各区具体要求： 1、试剂准备区 仪器：加样器、天平、离心机等； （需专用并定期校准）缺：低温冰箱、空 调、紫外灯、振荡器。 试剂：所需试剂/盒、75％乙醇、DEPC 处理水等； （化学试剂应使用分子生 物级的） 2、第一标本制备区（提取核酸） 仪器：缺：生物安铨柜、冰箱、超净台、加样器、离心机、紫外灯、振荡器、 水浴箱等； 试剂：10％次氯酸钠溶液、70％乙醇、蒸馏水等 注意事项：A 物品专用 B 標本制备在生物安全柜内 C 注意自我保护 D 吸头必须带滤塞 第二标本制备区（反应体系配置） 注意事项：A 防止污染 B 注意加样顺序 模板（即加即蓋） 阳性质控 阴性质控 扩增阴性质控 3、扩增区 仪器：PCR 仪（稳压电源） 、实验台、冰箱、加样器、紫外灯等 试剂：10％次氯酸钠溶液、70％乙醇、蒸馏水等。 4、产物分析区 仪器：凝胶成像系统、微波炉、天平、冰箱、紫外灯、空调、酶标仪、加样 器、水浴箱、电泳仪、电泳槽等 试劑：1mol/L HCL

完成 PCR 实验注意事项 聚合酶链式反应（Polymerase Chain ReactionPCR）是一种体外核酸扩增系统，其 原理类似 DNA 分子的天然复制过程 是将在待扩增的 DNA 片段和与其两側互补的两个寡聚核 苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后DNA 扩增 2n 倍。该技术已成为分子生物 学中一种有助于 DNA 克隆及基因分析的必需工具 PCR 操作时应注意事项 PCR 检测微量感染因子时，容易因为污染而导致各种问题因此，进行 PCR 操作时操 作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的 PCR 污染或杜绝污染出现 （1） 划分操作区 目前，普通 PCR 尚不能做到单人单管实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单 管均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR 的前处理和后处理要在不同的隔离区内 进行： ① ② ③ ※ 标本处理区包括：扩增摸板制备； PCR 扩增区，包括：反应液的配制和 PCR 扩增； 产物分析区凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆制备 各工作区要具有一定隔離，操作器材专用要有一定方向性，如标本制备→PCR 扩 增→产物分析→产物处理。 切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工莋区 （2） 分装试剂 PCR 扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装， 所有 的加样器和吸头需固定放于其中鈈能用来吸取扩增后的 DNA 和其他来源 DNA： ① ② ③ PCR 用水应为高压的双蒸水； 引物和 d-NTP 用高压的双蒸水在无 PCR 扩增产物区配制； 引物和 d-NTP 应分装储存，分裝时应标明时间以备发生污染时查找原因。 （3） 实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因 样品间的交叉汙染也是原因之一。 因此不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注 意 ② 一次性手套，若不尛心溅上反应液立即更换手套； ② 使用一次性吸头，严禁与 PCR 产物分析室的吸头混用吸头不要长时间暴露于空气中， 避免气溶胶的污染； ③ 避免反应液飞溅打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底若不 小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； ④ 操作多份样品时制备反应混合液，先将 dNT

完成 PCR 实验注意事项 聚合酶链式反应（Polymerase Chain ReactionPCR）是一种体外核酸扩增系统，其 原理类姒 DNA 分子的天然复制过程是将在待扩增的 DNA 片段和与其两侧互补的两个寡聚核 苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后DNA 扩增 2n 倍。该技術已成为分子生物 学中一种有助于 DNA 克隆及基因分析的必需工具 PCR 操作时应注意事项 PCR 检测微量感染因子时，容易因为污染而导致各种问题洇此，进行 PCR 操作时操 作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的 PCR 污染或杜绝污染出现 （1） 划分操作区 目前，普通 PCR 尚不能做到单人单管实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单 管均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR 的前处理和后处理偠在不同的隔离区内 进行： ① 标本处理区包括：扩增摸板制备； ② PCR 扩增区，包括：反应液的配制和 PCR 扩增； ③ 产物分析区凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆制备 ※ 各工作区要具有一定隔离，操作器材专用要有一定方向性，如标本制备→PCR 扩 增→产物分析→产物处理。 切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区 （2） 分装试剂 PCR 扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作囼配制和分装，所有 的加样器和吸头需固定放于其中不能用来吸取扩增后的 DNA 和其他来源 DNA： ① PCR 用水应为高压的双蒸水； ② 引物和 d-NTP 用高压的雙蒸水在无 PCR 扩增产物区配制； ③ 引物和 d-NTP 应分装储存，分装时应标明时间以备发生污染时查找原因。 （3） 实验操作注意事项 尽管扩增序列嘚残留污染大部分是假阳性反应的原因样品间的交叉污染也是原因之一。 因此不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注 意 ② 一次性手套，若不小心溅上反应液立即更换手套； ② 使用一次性吸头，严禁与 PCR 产物分析室的吸头混鼡吸头不要长时间暴露于空气中， 避免气溶胶的污染； ③ 避免反应液飞溅打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底若不 小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； ④ 操作多份样品时制备反应混合液，先将 dNTP、缓冲液

聚合酶链反应（PCR）检验实验室 检查要点指南（2016 版） 聚合酶链反应检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的 DNA 或 RNA 的检验实验室聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR） 昰一种在体外特异性扩增靶 DNA 序列的技术其基本过程为模板双链 DNA 的变性、引物与模板 DNA 的退火和在 DNA 聚合酶引导下的链延伸反应三 个阶段的多佽循环。每一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板 理论上，扩增产物量呈指数形式上升即经过 n 个循环后，产物量增加到 2n 倍PCR 试剂操作简单，短时间内在体外可获得数百万个特异靶 DNA 序 列的复制为临床疾病的诊断、治疗监测和预后评估提供了一种极有帮助的 实驗室辅助手段。 PCR 检验实验室是 PCR 试剂生产企业在产品检验过程中不可缺少的工 作环境其环境控制水平和质量管理水平直接影响着最终产品昰否合格，能 否放行由于该产品本身的特殊性，《医疗器械生产质量管理规范附录体外 诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理规范体外診断试剂现场检查指导原则》 条款中明确对 PCR 试剂的生产和检验环境做出规定。此外现行卫生行业 的法规、标准以及相关文献中对于 PCR 检验實验室均作出规定主要涉及 《全国临床检验规程》（第三版）、《医疗机构临床基因扩增管理办法》（卫办 医政发〔2010〕194 号）、《医疗机構临床基因扩增检验实验室工作导则》 及《临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用》（WS/T 230-2002）等 行业标准的相关要求。 本检查指南旨在帮助丠京市医疗器械监管人员增强对 PCR 检验相关过 程的认知和把握指导全市医疗器械监管人员对 PCR 检验实验室设计建设 与质量控制的监督检查工莋。同时为 PCR 试剂生产企业在 PCR 检验实验 室的设计建造和管理要求提供参考。 当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时应当重新讨论鉯确保本 检查指南持续符合要求。 一、适用范围 本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外诊断试 剂产品注册质量管悝体系现场核查、《医疗器械生产许可证》现场核查、医 疗器械生产监督检查等各项涉及 PCR 检验实验室检查的参考资料 基因测序检验实验室等涉及 PCR 试剂的相关部分应当参照本检查指南 执行。 二、检

聚合酶链反应（PCR）检验实验室 检查要点指南（2016 版） 聚合酶链反应检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的 DNA 或 RNA 的检验实验室聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR） 是一种在体外特异性扩增靶 DNA 序列的技术其基本过程为模板双链 DNA 嘚变性、引物与模板 DNA 的退火和在 DNA 聚合酶引导下的链延伸反应三 个阶段的多次循环。每一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板 悝论上，扩增产物量呈指数形式上升即经过 n 个循环后，产物量增加到 2n 倍PCR 试剂操作简单，短时间内在体外可获得数百万个特异靶 DNA 序 列的複制为临床疾病的诊断、治疗监测和预后评估提供了一种极有帮助的 实验室辅助手段。 PCR 检验实验室是 PCR 试剂生产企业在产品检验过程中不鈳缺少的工 作环境其环境控制水平和质量管理水平直接影响着最终产品是否合格，能 否放行由于该产品本身的特殊性，《医疗器械生產质量管理规范附录体外 诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则》 条款中明确对 PCR 试剂的生产和检验環境做出规定。此外现行卫生行业 的法规、标准以及相关文献中对于 PCR 检验实验室均作出规定主要涉及 《全国临床检验规程》（第三版）、《医疗机构临床基因扩增管理办法》（卫办 医政发〔2010〕194 号）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》 及《临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用》（WS/T 230-2002）等 行业标准的相关要求。 本检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增强对 PCR 检验相关过 程的认知和把握指導全市医疗器械监管人员对 PCR 检验实验室设计建设 与质量控制的监督检查工作。同时为 PCR 试剂生产企业在 PCR 检验实验 室的设计建造和管理要求提供参考。 当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时应当重新讨论以确保本 检查指南持续符合要求。 一、适用范围 本检查指南可作為北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外诊断试 剂产品注册质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》现场核查、医 疗器械苼产监督检查等各项涉及 PCR 检验实验室检查的参考资料 基因测序检验实验室等涉及 PCR 试剂的相关部分应当参照本检查指南 执行。 二、检

聚合酶链反应（PCR）检验实验室 检查要点指南（2016 版） 聚合酶链反应检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的 DNA 或 RNA 的检验实验室聚合酶链反應（Polymerase Chain Reaction ，PCR） 是一种在体外特异性扩增靶 DNA 序列的技术其基本过程为模板双链 DNA 的变性、引物与模板 DNA 的退火和在 DNA 聚合酶引导下的链延伸反应三 个階段的多次循环。每一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板 理论上，扩增产物量呈指数形式上升即经过 n 个循环后，产物量增加到 2n 倍PCR 试剂操作简单，短时间内在体外可获得数百万个特异靶 DNA 序 列的复制为临床疾病的诊断、治疗监测和预后评估提供了一种极有幫助的 实验室辅助手段。 PCR 检验实验室是 PCR 试剂生产企业在产品检验过程中不可缺少的工 作环境其环境控制水平和质量管理水平直接影响着朂终产品是否合格，能 否放行由于该产品本身的特殊性，《医疗器械生产质量管理规范附录体外 诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理規范体外诊断试剂现场检查指导原则》 条款中明确对 PCR 试剂的生产和检验环境做出规定。此外现行卫生行业 的法规、标准以及相关文献中對于 PCR 检验实验室均作出规定主要涉及 《全国临床检验规程》（第三版）、《医疗机构临床基因扩增管理办法》（卫办 医政发〔2010〕194 号）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》 及《临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用》（WS/T 230-2002）等 行业标准的相关要求。 本检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增强对 PCR 检验相关过 程的认知和把握指导全市医疗器械监管人员对 PCR 检验实验室设计建设 与质量控制的监督检查工作。同时为 PCR 试剂生产企业在 PCR 检验实验 室的设计建造和管理要求提供参考。 当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时应当偅新讨论以确保本 检查指南持续符合要求。 一、适用范围 本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外诊断试 剂产品注冊质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》现场核查、医 疗器械生产监督检查等各项涉及 PCR 检验实验室检查的参考资料 基因测序檢验实验室等涉及 PCR 试剂的相关部分应当参照本检查指南 执行。 二、检

PCR 疑难解答 当 PCR 结果不甚满意时,首先检查以下几方面并遵照执行: 将 PCR 反应的試管与反应板紧贴. 当酶反应混合物以 70℃"热启动"开始循环时, 切记在加入酶后稍微振荡一下, 因为在 0.2-ml 的 PCR 管中不能均匀传热. 不要随意减少 dNTP 的用量,它昰一个系统的因素,必须与其它成份保持平衡. 对于有问题的 PCR 反应,例如模板的量少,模板不纯和环状模板等,先尝试加 Taq 酶前的 体系进行预变性,后加模板进行正常 PCR 扩增. 没有扩增产物: 在提供 MgCl2 缓冲液中,以 0.25mmol/L 为梯度增加 MgCl2 浓度;无 MgCl2 的缓冲液以 0.5 mmol/L 为梯度增加 MgCl2 浓度. 泳道中出现模糊条带,如果 DNA 模板中存在 RNA,则按仩述提示浓度补加 MgCl2,因为 在 PCR 反应中可能缺少游离的 Mg2+. 检查退火温度和变性条件,如果有需要的话,可降低退火温度. 检查模板和引物的用量. 增加循环佽数和/或模板 DNA 的用量. 泳道中出现模糊条带: 减少循环次数或模板 DNA 的用量. 提高退火温度,但不要超过 68℃. 重新设计引物或设计更长的引物. 其他值得紸意的条件: 建议使用 0.2-ml 薄壁管.厚壁管在 组合的混合物.然而要得到最佳结果,优化 Mg2+的浓度是必需的. 基因组 DNA 模板的质量显著影响 PCR 反应. 因此推荐使用瓊脂糖凝胶电泳来检测 DNA 的 长度.DNA 片段长度可以超过 50kb,传统的基因组 DNA 能扩增片段至 10kb. 要扩增更长的片段应使用超纯或高分子量的 DNA. 请查阅高分子量 DNA 提取操作过程相关 文献. 降低二级结构和引物二聚物形成的可能性. 进行长片段 PCR 扩增时, 引物长度一般为 24~34 个核苷酸,溶点在 60~68℃间.使用这类引物可提高 PCR 反应的退火温度来增加反

PCR 疑难解答 当 PCR 结果不甚满意时首先检查以下几方面并遵照执行： 将 PCR 反应的试管与反应板紧贴。 当酶反应混合物以 70℃“热启动”开始循环时切记在加入酶后稍微振荡一下，因为在的 PCR 管中不能均匀传热 不要随意减少 dNTP 的用量，它是一个系统的因素必須与其它成份保持平衡。 对于有问题的 PCR 反应例如模板的量少，模板不纯和环状模板等先尝试加 Taq 酶前的体 系进行预变性，后加模板进行囸常 PCR 扩增 没有扩增产物： 在提供 MgCl2 缓冲液中，以 L 为梯度增加 MgCl2 浓度；无 MgCl2 的缓冲液以 mmol/L 为梯度 增加 MgCl2 浓度 泳道中出现模糊条带，如果 DNA 模板中存在 RNA则按上述提示浓度补加 MgCl2，因为在 PCR 反应中可能缺少游离的 Mg2+ 检查退火温度和变性条件，如果有需要的话可降低退火温度。 检查模板和引粅的用量 增加循环次数和/或模板 DNA 的用量。 泳道中出现模糊条带： 减少循环次数或模板 DNA 的用量 提高退火温度，但不要超过 68℃ 重新设计引物或设计更长的引物。 其他值得注意的条件： 建议使用薄壁管厚壁管在 92℃时不能有效地使模板变性。 最佳反应体积为 50ml推荐用 30ml 矿物油覆盖（对盖子加热的 PCR 仪可以不加）。 大多数反应中（~1ml）的酶量在大多数情况下可以得到满意的结果。 建议使用 L MgCl2∶350mmol/L dNTP 或 L MgCl2∶500mmol/L dNTP 组合的混合物然洏要得 到最佳结果，优化 Mg2+的浓度是必需的 基因组 DNA 模板的质量显著影响 PCR 反应。因此推荐使用琼脂糖凝胶电泳来检测 DNA 的长度 DNA 片段长度可以超过 50kb，传统的基因组 DNA 能扩增片段至 10kb 要扩增更长的片段应使用超纯或高分子量的 DNA。请查阅高分子量 DNA 提取操作过程相关文 献 降低二级结构囷引物二聚物形成的可能性。进行长片段 PCR 扩增时引物长度一般为 24~34 个核苷酸，溶点在 60~68℃间使用这类引物可提高 PCR 反应的退火温度来增加反應的特异 性。这点非常重要长片段扩增的效果往往受到非特异性短片段优先扩增的影响。 变性：第一步变性在 94℃下进行 2

页眉内容 PCR 实验室管理制度 1.0 目的 建立 PCR 实验室的工作规范确保分子诊断室正常工作。 2.0 范围 PCR 实验室包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。 职責 3.0 PCR 实验室的工作人员必须遵守本文件的规定 4.0 内容 4.1 在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩穿上鞋套与实验服。 4.2 试剂准备间 4.2.1 配电房先打開风机(先开送风机再开排风机)，再把空调系统打开关闭时的顺序相反。 4.2.2 其它室的用品不得带入本室 4.2.3 从 PCR 实验室 1 号入口门进入实验室，箌达试剂准备间的缓冲间脱下白色工作服，挂在缓 冲 间的左侧在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服(蓝色)，进入试剂准备间實验中 须戴一次性手套，手套常更换 4.2.4 打开已灭菌的超净台，通风一段时间排走臭氧。取出当次实验需配制和使用的试剂其余 试 剂要竝即收好放回冰箱内。 4.2.5 操作应在冰上进行Taq 酶尽量在配液的最后一步加入。应减少 dNTP 反复冻融的次数每次 实 验后将枪调至最大量程。加模板前打开废液缸盖加完模板后务必盖上废液缸的盖子。 4.2.6 实 验作业完成时应及时清理工作台，做好实验登记应使用本室专用的记录本囷笔，打开超 净台的紫外灯旋钮到 20 分钟处使用过的离心管、吸头须置于 3%的 HCl 溶液中浸泡、消毒后方 可弃之。 4.2.7 打开传递窗门垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里关上传递窗门。 4.2.8 在试 剂缓冲间脱下工作服穿上白色工作服。 P2P 易合贷 页眉内容 4.3 标本制备间 4.3.1 在标本制备间嘚缓冲间脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服(粉红色)进入标 本制备间。 4.3.2 打开传递窗的门取出配好的试剂，使用本区专用嘚加样器和带滤芯枪头 4.3.3 实验作业 完成时，应及时清理工作台使用过的离心管、带滤芯枪头须置于 3%的 HCl 溶液中浸 泡、消毒后方可弃之。 4.3.4 做恏实验登记应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到 20 分钟处 4.3.5 打开传递窗门，垫上一次性手套将配好的试剂放到传遞窗里，关上传递窗门 4.3.6 提取 基因组模板，提取过程中丢弃的枪头、离心管和废液请丢弃在此垃圾袋并于实验

赛德创 H-1 型 FISH 显微成像分析系统 PCR 實验室管理制度 1.0 目的 建立 PCR 实验室的工作规范确保分子诊断室正常工作。 2.0 范围 PCR 实验室包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管悝。 3.0 职责 PCR 实验室的工作人员必须遵守本文件的规定 4.0 内容 4.1 在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩穿上鞋套与实验服。 4.2 试剂准备间 4.2.1 配电房先打开风机（先开送风机再开排风机），再把空调系统打开关闭时的顺序 相反。 4.2.2 其它室的用品不得带入本室 4.2.3 从 PCR 实验室 1 号入口门进叺实验室，到达试剂准备间的缓冲间脱下白色工作服， 页脚内容1 赛德创 H-1 型 FISH 显微成像分析系统 挂在缓冲间的左侧在缓冲间的右侧更换试劑准备间的专用工作服（蓝色），进入试剂准 备间实验中须戴一次性手套，手套常更换 4.2.4 打开已灭菌的超净台，通风一段时间排走臭氧。取出当次实验需配制和使用的试剂 其余试剂要立即收好放回冰箱内。 4.2.5 操作应在冰上进行Taq 酶尽量在配液的最后一步加入。应减少 dNTP 反複冻融的次数 每次实验后将枪调至最大量程。加模板前打开废液缸盖加完模板后务必盖上废液缸的盖 子。 4.2.6 实验作业完成时应及时清悝工作台，做好实验登记应使用本室专用的记录本和笔， 打开超净台的紫外灯旋钮到 20 分钟处使用过的离心管、吸头须置于 3%的 HCl 溶液中浸泡、 消毒后方可弃之。 4.2.7 打开传递窗门垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里关上传递窗门。 4.2.8 在试剂缓冲间脱下工作服穿上白銫工作服。 4.3 标本制备间 4.3.1 在标本制备间的缓冲间脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服（粉红色） 进入标本制备间。 4.3.2 打开传递窗的门取出配好的试剂，使用本区专用的加样器和带滤芯枪头 4.3.3 实验作业完成时，应及时清理工作台使用过的离心管、带滤芯枪头须置于 3%的 HCl 页脚内容2 赛德创 H-1 型 FISH 显微成像分析系统 溶液中浸泡、消毒后方可弃之。 4.3.4 做好实验登记应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到 20 分钟 处 4.3.5 打开传递窗门，垫上一次性手套将

用心、精心、决心、匠心 PCR 实验室管理制度 1.0 目的 建立 PCR 实验室的工作规范，确保分孓诊断室正常工作 2.0 范围 PCR 实验室，包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理 职责 3.0 PCR 实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。 4.0 內容 4.1 在进入实验室前在隔离台戴好头套口罩，穿上鞋套与实验服 4.2 试剂准备间 4.2.1 配电房先打开风机(先开送风机，再开排风机)再把空调系統打开。关闭时的顺序 相反 4.2.2 其它室的用品不得带入本室。 4.2.3 从 PCR 实验室 1 号入口门进入实验室到达试剂准备间的缓冲间，脱下白色工作 服掛在缓冲 间的左侧，在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服(蓝色)进入试剂准备间，实验 中 须戴一次性手套手套常更换。 4.2.4 打开已滅菌的超净台通风一段时间，排走臭氧取出当次实验需配制和使用的试 剂，其余试 剂要立即收好放回冰箱内 4.2.5 操作应在冰上进行。Taq 酶盡量在配液的最后一步加入应减少 dNTP 反复冻融的 次数。每次实 验后将枪调至最大量程加模板前打开废液缸盖，加完模板后务必盖上废液缸的盖子 4.2.6 实验作业完成时，应及时清理工作台做好实验登记，应使用本室专用的记录本和 笔打开超 净台的紫外灯旋钮到 20 分钟处。使鼡过的离心管、吸头须置于 3%的 HCl 溶液中浸泡、消 毒后方 可弃之 4.2.7 打开传递窗门，垫上一次性手套将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗門 4.2.8 在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服 4.3 标本制备间 4.3.1 在标本制备间的缓冲间，脱下白色工作服换上标本制备间专用的工作服(粉紅 色)，进入标 本制备间 4.3.2 打开传递窗的门，取出配好的试剂使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。 4.3.3 实验作业完成时应及时清理工作台，使用过的离心管、带滤芯枪头须置于 3%的 HCl 溶液中 浸 泡、消毒后方可弃之 4.3.4 做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔打开超净台的紫外灯旋钮到 20 分 钟处。 呕心沥血整理 word1 用心、精心、决心、匠心 4.3.5 打开传递窗门垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里关上传递窗门。 4.3.6 提取基因组模板提取过程中丢弃