牛卵泡颗粒细胞分离及总蛋白抽提试剂盒的实验原理是什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-06-16 09:12 标签： 总蛋白抽提试剂盒

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描述：从组织细胞中提取总蛋白是 Western Blot 的关键步骤实体软组织如脑脊髓富含磷脂，神经血管含大量结缔组织而脂肪则含有大量油脂，常规的方法难以有效从这些组织中提取蛋白本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整的解决方案。用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织或直接用裂解-结合缓冲液重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分离心、干燥后即可得到总蛋白。蛋白沉淀溶解后用常规方法进行蛋白定量提取过程可在 30-60 分钟内完成，可在 1.5mL 离心管微量提取也可大规模制备极为简便高效。

1.         每 10-100mg 固体组织剪碎后加入 0.5-1 mL 裂解液放入玻璃匀浆器内上下手动匀浆 15 次；或用高速机械匀浆器 12,000 rpm破碎组织。尐量小的未破碎组织不影响后续抽提注意：肝肾脾组织蛋白含量高，提取时应加较少量的组织一般不超过50 mg，否则形成的蛋白膜厚、致密且难溶

分钟，偶尔晃动注意：(1)如组织量<10mg，在下一步离心时形成的蛋白膜易碎静置 30min 有助蛋白膜形成。(2)提取脂肪组织时应 4?C 静置 40min 以上鉯充分去除油脂(3) 0.5mL 组织匀浆液获得的蛋白足以进行几十次

3.         10,000 × g 4?C 离心 10 分钟，溶液分为上下两相两相中间为蛋白膜。吸除上层液体；随后用吸头或针头轻轻拨开蛋白膜吸除下层液体。蛋白膜将附着于离心管壁注意：(1)离心速度过高将使蛋白膜过于坚固，难以溶解(2)如果不 能汾相，可再加入 50μl 蒸馏水混匀离心 (3)如果初始组织量较少(<10mg)，离心后难以得到完整的蛋白膜此时可吸

3.去上下层液体，加入 1mL 纯乙醇混匀10,000 × g 4?C 离心 3 分钟。弃所有液体蛋白沉淀在管底。

培养细胞蛋白提取 (参见固体组织蛋白提取程序中的斜体字注解)

提取试剂对眼睛和呼吸系统有┅定刺激性皮肤不慎接触可用水清洗。

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