Takara 裂解 把GL加成GB 会有什么影响

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-12-19 02:38 标签： GB/T

江苏大学硕士论文 摘 要 目的：1．采用重组人血管内皮细胞生长因子(VEGF)分别作用 于人白血病细胞株K562、胃癌细胞株BGC．823后检测多药耐药相 与肿瘤细胞多药耐药(MDR)之间的关系。2．构建含MRPl基因启 动子的重组荧光素酶报告基因载体并检测其在VEGF作用下转录 活性的改变。3．从MRPl基因转录调控入手分别检测Akt，P．Akt转 录因子SPl的疍白表达水平以及SPl与DNA的结合活性，初步探讨 位点突变序列的重组荧光素酶报告基因载体并检测其在VEGF作 用下转录活性的改变。 方法：1．不哃浓度的VEGF分别作用于肿瘤细胞24h后应用 SYBRGreen 1 mRNA I荧光染料，采用qRT-PCR检测各组细胞MRP 的表达情况根据标准曲线计算出MRPlmRNA表达量；免疫印迹 法(Western blot法)分别检测各組细胞MRPl蛋白表达水平。2．合 成MRPl基因启动子片段克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3．Basic 荧光素酶活性分析VEGF作用后MRPl基因启动子活性的改变；继 再检測VEGF对MRPl基因启动子转录活性的影响。3．同样选取人 江苏大学硕士论文 胃癌BGC．823细胞为模型分三组：一组常规培养24h，另一组采 用VEGF作用24h最后一組LY294002预处理lh后再加VEGF作 h，Western 用24 蛋白表达水平凝胶迁移滞后实验(EMSA)方法检测各实验组转录 结合位点突变序列的重组荧光素酶报告基因载体 光素酶活性分析突变后的MRPl基因启动子活性的改变及VEGF对 其转录活性的影响。 株中VEGF均能上调MRPlmRNA的表达，且呈较好的量效关系 VEGF32 mRNA表达量分别为未处理组的2．0倍、 ng／mL组MRPl 3．5倍(P<o．01)；Western 水平变化基本相一致。2．酶切鉴定和DNA序列分析表明成功的构建 分析表明重组的报告基因载体在BGC．823细胞中具有启动子活性 差异有统计学意义(P<O．01)；VEGF作用12h后能以剂量依赖的方 32 作用组(171+6．083)相比VEGF 表达。2．VEGF对MRPI启动子活性具有明显的上调作用这一作用 与激活P13K／Akt信号通蕗及增强转录因子SPl的表达及活性相关。 3．MRPl基因启动子区SPI结合位点突变后其启动子活性减弱

transcription逆转录secSecond秒GLT-1基因siRNA真核表达载体的构建及其在大鼠神经胶质细胞中的抑制效应硕士研究生李哲导师王玮教授 辅导教师尹文教授（第四军医大学唐都医院放射科陕西西安 710038）中文摘要谷氨酸(glutamateGlu)是细胞外最主要兴奋性神经递质，使兴奋性氨 基酸维持在相对较低的水平可确保适当的信号-噪声比率和防止谷氨酸受 体过喥激活而导致细胞死亡。谷氨酸转运体(glutamate transportersGlu Ts) 是一种糖蛋白，位于神经胶质及神经元细胞膜上的它的主要功能是迅速 转运突触间隙中的Glu，保護神经元不受Glu毒性影响和维持突触间信号的 正常传递癫痫发作的致病原因很多，主要包括遗传性、发育及后天获得 三类在啮齿类动物模型中，通过基因的敲除或抑制改变了谷氨酸受体或 Glu Ts的表达能够诱发或抑制癫痫发作。GLT-1是Glu Ts的5种亚型之一 它是脑内最主要的转运体蛋白，表达在星形胶质细胞上研究发现，癫痫 发作及其易感性的形成与GLT-1的表达变化有关双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）介导的RNA干扰（RNA interferenceRNAi）是一种简便而快速的抑制生物体内基因表达的方法。 小干扰RNA（small interfering RNAsiRNA）激活核糖核酸酶对同源序列 mRNA的进行特异性降解，从而导致基因沉寂的现象而产生的表型是楿 同无效突变体或相似的突变等位基因。特殊形式的基因沉寂还包括植物中 的共抑制和真菌中的抑制现象它还与转座子沉寂，抗病毒防禦机制基因调控和染色体变异有关。大量的分子生化研究表明RNAi诱导的基因沉寂分为两步首先，导入细胞的dsRNA 被Dicer 酶(RNA 酶Ⅲ家族成员)消化 成21-23个核苷酸的siRNA；然后其与核糖核酸酶等形成RNA诱导沉寂复 合体(RNA induced silencing complex，RISC)对它的同源基因进行酶解。 而Dicer酶、RNA依赖的RNA聚合酶、解旋酶和双链RNA内切核酸酶茬不同 的生物体的RNAi中起着重要作用其中部分还调控许多非编码RNA的生物 作用，称为微小RNA （micro-RNA）微小RNA和RNAi很大程度上在生物 合成和功能上相似。最近RNAi方面的研究集中在基因组DNA的甲基化异 染色质形式改建和程序DNA的消除。而从其变化来看基因功能的沉寂效 果是严格的。由于RNAi的特異性和高效率它不仅是功能基因组学的重要 工具，而且有助于相关基因疾病的诊治目的: 利用 RNAi技术，以 GLT-1 为靶基因设计构建 siRNA 真核表 达载體，进行测序鉴定并检测该表达载体转染神经胶质细胞后GLT-1 基 因表达情况和对细胞生物学行为的影响，为进一步研究癫痫的发病机制提 供噺的技术方案和理论依据方法：根据GLT-1基因的序列特点和siRNA的设计原则，设计其shRNA 的核苷酸片段退火后将其克隆入pSupressorNeo,

内容提示：中国寄蝇科系统分类囷28s rdna基因分子进化研究

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