97处决和97生化危机3服装选择选哪个

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-10-27 09:00 标签： 生化危机5怎么选主角
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【求助】请教：SDS-PAGE水平胶蛋白质markers97.4kda的带为什么很弱？
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这个帖子发布于11年零201天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位一个问题，请高手指点一下：我做的pharmacia 的水平sds-page,12％分离胶，跑的蛋白质markers中分子量为97.4kda的条带很弱，一照相就看不出来了，而且有的条带很虚的样子，并不是象核酸电泳时的markers带那么均匀一致。 请教各位！先谢了。
不知道邀请谁？试试他们
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请教一下，是否是因为离浓缩胶太近，没有跑出来 ？
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shiyanling 我做的pharmacia 的水平sds-page,12％分离胶，跑的蛋白质markers中分子量为97.4kda的条带很弱，一照相就看不出来了，而且有的条带很虚的样子，并不是象核酸电泳时的markers带那么均匀一致。是否是因为离浓缩胶太近?不是因为离浓缩胶太近,是你marker的含量不一而造成的,因为marler每个组分含量不是相同的,我用的marker大分子量含量就很低,在说明书的图上都可以看出来.另外可能的原因是降解,因为大分子量蛋白更容易降解为分子量不等的片段而导致条带减弱,这个在使用过程中可以明显体现出来(实际上ladder时间长了也是同样的现象,各条带边缘模糊,因为蛋白没有DNA坚强,所以更容易降解).由于marker上样量少也会导致条带模糊不清,于降解后的效果一样.你可以通过增大上样量解决因上述2原因引起的问题.
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谢谢yaplewang 兄的详细介绍。你的解释也能说得通。因为那条带的位置尽有条痕迹的感觉。但是我是把markers 变性了以后才用的啊，用前是干粉，用时分装后再变性的。发完帖以后我突然想会不会是因为最小的带14.4左右kda的带跑出去了，而误认为是没有最后的那条97.4KD的带了。因为有的战友说跑12％的分离胶，小的markers 带很可能跑到溴酚兰的前面去。不过这种可能性不大，因为之前我用bio-rad的垂直SDS-PAGE12％的分离胶markers6条带都可以跑出来。对于上样量（其实我的上样量也可以了，其它带特亮，上样0.8-0.7μl）。下次试试加1μl。
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shiyanling 发完帖以后我突然想会不会是因为最小的带14.4左右kda的带跑出去了，而误认为是没有最后的那条97.4KD的带了。因为有的战友说跑12％的分离胶，小的markers 带很可能跑到溴酚兰的前面去。1
不知你marker是什么特性，不过一般非彩色marker都在特定的条带给予标记（比如其他是兰色而此条是红色，或者此条于其他相比特别蓝，一般是中间那个marker）以便于确定。你看看说明书有没有这么一个条带，若有，则可据此条带判断上下条带的分子量。2
据说溴酚兰相当于7kd，12％的分离胶14.4kd不会超越溴酚兰。倒是有一种可能：浓度低的胶（如6~8%）因分辨率低而无法分开小分子量，可能导致低分子量marker与溴酚兰混在一起，这个现象我是遇过的，12％胶14.4kd是有可能的。所以我判断marker通常是从高分子起步。3
还有一个就是marker并不是均一分布的，在12%的胶上有特定的迁移率（比如哪两条靠的特别紧，哪两条靠的特别远），据此整体印象也可以大致判断marker。
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谢谢yaplewang 兄的指导。我用的水平SDS-PAGE（法马西亚）浓缩胶是7.5%,垂直SDS-PAGE（伯乐）却是4.5％的。因为做的电泳实在是不多，所以没有什么经验。有了您的知道，太感谢了。
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谢谢yaplewang 兄的指导。我用的水平SDS-PAGE（法马西亚）浓缩胶是7.5%,垂直SDS-PAGE（伯乐）却是4.5％的。因为做的电泳实在是不多，所以没有什么经验。有了您的指导，太感谢了。
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