人乙型肝炎病毒DNA阳性血清对人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的影响--《北京大学学报(医学版)》2008年05期
人乙型肝炎病毒DNA阳性血清对人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的影响
【摘要】：目的:探索人乙型肝炎病毒感染血清对间充质干细胞向肝细胞分化的影响,为肝细胞移植提供实验基础。方法:体外分离和纯化骨髓间充质干细胞,接种在肝细胞诱导培养基中,刺激干细胞向肝细胞分化。设立4个实验组加入不同血清:A组,5%(体积分数)胎牛血清(FBS);B组,2.5%(体积分数)FBS+2.5%(体积分数)乙型肝炎感染血清;C组,2.5%FBS+2.5%(体积分数)正常人血清;D组,以含10%(体积分数)FBS的LG-DMEM培养液作为对照。诱导培养后,利用免疫组织化学染色检测肝细胞特异性标志,以及感染细胞是否表达乙型肝炎特异性蛋白。应用糖原染色技术检测细胞合成和储存糖原的功能。结果:诱导组的间充质干细胞表达白蛋白(ALB)和甲胎球蛋白(AFP),并具备合成和储存糖原的功能。B组细胞加入感染血清后,扩增能力受到抑制,少量细胞可表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg),但ALB和AFP的表达阳性率以及糖原储存能力与C组相似。荧光共聚焦技术检查可见部分细胞同时表达ALB和HBsAg。结论:骨髓间充质干细胞在特定的肝细胞诱导条件下具有向肝细胞分化的能力;乙型肝炎感染血清可以明显抑制间充质干细胞的体外扩增,但对其向肝细胞分化没有明显影响。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R373【正文快照】：
在我国,乙型肝炎复发已成为肝硬化患者肝移植术后死亡的首要原因。随着对肝干细胞研究的不断深入,人们希望它能够完全或在一定程度上替代肝移植治疗。这样,干细胞移植受者体内的乙型肝炎病毒(HBV)是否会影响干细胞的扩增与分化,已成为肝干细胞移植成功与否的重要影响因素。有
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京公网安备74号TICEBA——ABCB5阳性真皮间充质干细胞提纯技术机构
18:55 &&来源：甘肃经济日报
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　　机构介绍　　TICEBA是拥有哈佛先进技术的，世界上唯一可以应用ABCB5阳性真皮间充质干细胞提纯技术的机构，在全球最高标准的GMP实验室中对干细胞进行分离、体外培养、定向诱导等，经过哈佛的研究专利及海德堡的临床应用，为实现糖尿病的干细胞治疗带来了新的突破。　　德国TICEBA干细胞机构是权威的欧洲生物医药技术协会(EAPB)的成员机构。Ganss博士也曾与Frank共同进行研究。TICEBA拥有哈佛先进的技术。
　　1德国TICEBA干细胞机构是权威的欧洲生物医药技术协会(EAPB)的成员机构。　　2 Ganss博士也曾与Frank共同进行研究。　　3 Ticeba全球唯一获得了应用哈佛大学医学院的ABCB5阳性真皮间充质干细胞技术的专用许可证书。　　4 TICEBA拥有主管机关颁发的根据《德国药品法》规定的利用人体组织作为生产医药品所需的授权，拥有自己的生物细胞实验室和冷却装置。　　该干细胞治疗糖尿病的原理是：针对ABCB5蛋白靶向定位真皮间充质干细胞，从而能够提纯出高质量的间充质干细胞亚群，这个干细胞亚群可移植到胰腺部位，在胰岛的微环境下定向分化为胰岛素β细胞并起到修复受损细胞和再生的作用。　　优势　　安全性是首位　　在大多数发达国家，干细胞治疗均由食品药品监督管理局（FDA）负责监管，并建立了临床级细胞生产质量管理体系及相应的产品标准。　　技术先进的指标　　除TICEBA外，没有其他干细胞治疗机构可以提供如下数据，　　Identity能够辨识干细胞身份的认证　　Purity干细胞单体纯度　　Potency单个干细胞的扩展性　　Impurities准确认证干细胞的杂质含量　　Sterility每一个干细胞的可培育性和再生能力　　CellViability可以被复制的干细胞可行性　　Totalnumber of cells总体干细胞数量　　而TICEBA除了能够提供这些数据外，还都能够达到或超过欧洲标准。能通过按照国际医学标准可以达到最高质量的要求和分项标准的测试。下面是TICEBA实际数值与欧盟标准及德国卫生部标准的比较。　　操作过程参数欧盟规定的临界值TICEBA实际值参考来源流式细胞术细胞活性≥50%≥90%欧盟药典2.7.29流式细胞术细胞增殖能力≥50%≥90%欧盟药典2.7.29Endosafe提供的内毒素检测系统内毒素欧盟药典2.6.14流式细胞术间充质干细胞与标志物共表达的准确性≥90%一致性100%德国卫生部基因表达/　　免疫荧光效能测定分化能力≥50%分化能力≥90%德国卫生部　　分析以上各指标：　　最重要的指标是间充质干细胞与标志物共表达的准确性，TICEBA采用了专利技术，即利用ABCB5蛋白靶向定位真皮间充质干细胞的亚群，从而有效分离目的干细胞，能够达到100%的准确性，这保证了提取的干细胞具有高活性（≥90%）、高增殖力（≥90%）、高分化力（≥90%），高纯度（99%），也确保了运用干细胞绝对安全性。　　TICEBA并不是在使用一个在研发阶段的技术，而是严格按照GMP的规定规范治疗　　药品是一种特殊商品。德国将干细胞产品也归入药品的范畴，无疑是对干细胞产品质量和与干细胞相关的操作流程的强调。　　药品的质量要求：安全、有效、均一、稳定和符合法定标准。决不允许不合格品投入使用。　　GMP第三方质量管理规范，让治疗更加有保障　　GMP是药品生产制造过程的质量管理规范，其质量管理范围涵盖，从对原辅料供应商的质量管理，到成品销售后，用户投诉、不良反应报告及处理的全过程。　　实施GMP的目的：防污染、防混淆、防人为差错。保证优质生产符合质量规定的药品。药品质量符合规定，不仅是药品质量符合法定质量标准，还应使其生产全过程符合GMP要求。　　GMP中心指导思想：药品的质量是设计、生产出来的，不是检验出来的。　　GMP的特点　　时效性，有实际意义的方面做出规定。　　强调法律责任。凡开办药品生产企业，必须向药品监督管理部门办理审批手续，其产品质量严格按GMP要求，接收监督。　　强调生产过程的全面质量管理。注重生产流程的检查与防范的紧密结合，且以防范为主要手段。　　重视为用户提供全方位、及时的服务。　　机构优势　　1、全球首家干细胞提取，培养以及存储机构　　TICEBA得到了德国体系认证，并通过欧盟自体干细胞医疗操作授权，可以实施干细胞的组织加工，干细胞存储及制备等操作程序的授权。所有操作均按照国际上最高标准执行，让您享受世界范围内最安全，最先进的干细胞技术。　　2、全球独占专利，全程保证所提取干细胞的质量与注射疗效　　TICEBA通过从自身组织中分离提取自体干细胞，从源头切断了排异反应发生的可能，同时，在公司首席科学家Frank教授及公司创始人Ganss博士的带领下，以临床应用为前提，成功实践了皮肤干细胞的提取。不仅如此，公司的医学顾问Frank博士，还首先发现了ABCB5 p糖蛋白并成功申请了该项发明的专利权，利用该项发明可以直接标记皮肤中的干细胞从而更加高效准确的将其分离出来。　　TICEBA运用全球独占专利技术，安全有效的提取分离干细胞的同时，更能够高质量的完成对干细胞的测定，进而保证所分离的干细胞处在最佳状态，确保干细胞注射后在您体内高效的完成细胞修复工作。　　3、高精尖仪器装备，全球顶级实验室配置　　最先进的硬件设施，保证了干细胞提取的安全性。　　特殊设计的通风装置，保证了干细胞的纯度。　　独立的供电系统，24小时的报警系统，保证了干细胞严格的低温存储条件。　　TICEBA更加人性化的设计在于，所有的实验室均为全方位可视玻璃，可以让来访者从各个角度观看整个实验操作，更加凸显Ganss博士对TICEBA技术及服务的信心。　　专家团队　　Ganss甘斯博士　　甘斯博士世代从医，甘斯博士的祖父毕业于海德堡医学院，曾经在海德堡医学院担任医学教授，并在德国开创了海德堡癌细胞研究中心。其父辈也毕业于海德堡医学院，毕业后在医学院任医学教授。甘斯博士本人同样毕业于海德堡医学院，他毕业后到美国学习并参与多项医学研究。2003年，甘斯博士和在哈佛医学院做研究的Frank教授共同开创了干细胞诊疗中心，在继续和哈佛医学院儿童研究院合作的同时，开始进行临床治疗。他们使用先进的干细胞技术在世界各地先后诊治了1500多例病人。　　弗兰克博士　　马克思弗兰克博士来自哈佛大学医学院，是国际干细胞研究专家，也是世界干细胞研究的佼佼者。在哈佛大学医学院的支持下，马克思弗兰克博士成功的研究出在皮肤中提取自身干细胞，并使用自身干细胞为临床疗法治疗慢性疾病、抗衰老和皮肤美容等。在哈佛大学医学院继续从事医学研究的马克思佛兰克博士每年在干细胞研究文献中发表多篇研究文章，为人类细胞学不断推出更新更广阔的研究成果。弗兰克博士撰写的“Identification of cells initiating human melanomas.”一文作为Nature 2008一月的封面文章被发表。　　Hasslacher,Prof. Dr. med. Christoph　　海德堡大学医学院糖尿病研究所所长　　1975年以来，专攻内科学，就职海德堡大学医学院附属诊所。　　1978年获得内科医学领域的博士后学位。　　1980年被评为主任医师职称。　　1985年被任命为海德堡大学荣誉教授。　　1991年获得内分泌/糖尿病诊疗资质。　　1993年被任命为St. Josefs医院内科主任。　　2009年被任命为St. Josefs医院临床研究学科带头人。　　Heckmann,Dr. med. Frank　　毕业于海德堡医学院　　在Mannheim Clinics（曼海姆诊所）获得内科医师任职资格，自1992年以来，独立行医，并一直专攻内科医学。　　1995年以来，开始研究血管学和静脉学。　　1996年加入ATOS诊所。　　1999年获得了任教资格，负责教授血管学，静脉学以及内科医学医师资格认证课程。　　2003年以来，担任医师任职资格委员会主席。　　2003年以来，担任欧洲预防医学会副主席。　　2010年获得欧盟特别贡献奖以奖励其在预防医学领域做出的突出贡献。　　是德国血管学研究会，德国静脉学研究会，欧盟预防医学会，德国超声检查协会会员。　　原理　　前往TICEBA中心接受自体干细胞治疗需要接受详细的实验室检查，对您进行健康评估后，由世界最好专家帮您私人定制专项检查方案，同时由ATOS给出综合解决方案。　　如何利用干细胞？　　取样制备细胞培养干细胞提取储存干细胞　　从腹股沟处取运用最先进3-4个月利用ABCB5低温无菌　　皮肤25px见方技术将皮肤培养期糖蛋白定向　　患者活动不受细胞分离出来提取干细胞　　限，当天即可　　运动或者洗澡　　提取与培养阶段　　首先从腹股沟部位取1-75px2的皮肤样本，从该样本中提纯目的干细胞的过程为德国TICEBA机构的核心专利技术。此项技术方法主要为应用抗体分离ABCB5阳性真皮间充质干细胞，然后进行细胞扩增以获取足够量的具有免疫调节性的ABCB5阳性真皮间充质干细胞，整个细胞培养时间耗时3到4个月。为了保证细胞的质量、纯度及活性，需要进行一套严格的质控检测评估。质量评估后的结果均可保证所提纯的干细胞纯度及活性等指标达到99%以上。为了更加进一步的确保干细胞的高质量，还要将检测后的细胞再放置3天后复查，若检测指标仍达到99%，完全确保安全性后才可将该干细胞实践。　　治疗阶段　　静脉回输：　　将获取的ABCB5阳性真皮间充质干细胞静脉注射到患者机体内，可以调节以T细胞为主的免疫反应，诱导免疫耐受，抑制炎性反应，修复受损胰岛素分泌细胞及促进再生，对于免疫排斥反应的调控及维持机体免疫平衡均起到重要作用。　　胰岛介入：　　将ABCB5阳性真皮间充质干细胞通过介入的方式移植到患者胰腺。该干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞，并对受损的细胞起到修复及再生的作用，重建胰岛功能，从而达到从源头上治疗糖尿病的目的，达到最佳效果。　　治疗分为四个周期：分别是干细胞提取培养阶段，后续干细胞治疗共二次。　　整个治疗过程将由TICEBA创始人，临床医师甘斯博士亲自接待，保证您享受到的是全程一对一VIP服务。优翔将会全程对您的病情进行健康促进干预。　　在中国拥挤的资源与庞大的需求中中，优翔将为您提供的是一对一，管家式的健康管理服务，为您把关每一步的健康行为，在您健康之旅中，全程陪伴，让您无后顾之忧。　　优翔贵宾申请赴德治疗流程　　第一步：向贵宾详细介绍干细胞的相关内容和大概费用　　第二步：同时须提交相关病例资料　　第三步：将所有资料翻译后反馈给德国TICEBA，由甘斯博士评估是否适合接受干细胞注射　　第四步：评估结果反馈后，与客人沟通，在得到客人的认可后，预约面试时间　　第五步：客人与优翔签署合同，支付定金　　第六步：准备签证资料，获得签证后，客户需支付全额费用，与德国TICEBA进行预约确认　　第七步：阅读赴德须知，做好出发前准备　　第八步：根据预定航班提前到达出发前城市　　第九步：前往德国开始健康之旅　　第十步：按照三个周期完成治疗，优翔建立健康档案，提供后续健康管理服务　　TICEBA执照编号内容注解：　　（1）许可证号　　（2）持证单位名称：TICEBA GmbH　　（3）实验室设备，仪器，设施存放地址：详细到了楼层和房间号，（实验室及相关医疗操作的环境受到监管）　　（4）许可证注册地址　　（5）许可范围：参见附录（也就是第十条内容），如果实验室设备，仪器未单独存放于上述登记地址，则本许可证对实验室设备及仪器的认可将被撤销。　　（6）许可证法律依据：德国药物法案中20b（2），20c的条款（第十条中详细介绍）。　　（7）许可证签发人签字　　（8）署名　　（9）日期　　（10）附录：　　许可范围适用于德国药物法案20c相关条款：对TICEBA的授权，授权对组织细胞进行加工，保存，检测，低温储藏，相关组织产品的出售及与组织细胞制备相关的操作。该加工手段是在欧盟备案并且被欧盟承认的，非工业生产化的加工。　　证书失效原则遵循德国药物法案20b（2）相关条款：对于组织细胞的加工，保存等上述提及的服务不得用于大规模的加工生产，且只能针对个人提供，医药企业不得享受上述服务。　　证书关于实验室的规定适用于德国药物法案20b（2）相关条款：违反上述情况，则对实验室予以查封。　　注释：对设备管理的要求，进行编号且有固定规章保证实验室设备管理有序。
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脂肪源性间充质干细胞CD73阳性亚群体外分化能力评价
【摘要】：背景缺血性心脏病发病率和死亡率极高,严重威胁人类健康。心肌一旦梗死,心肌细胞数量迅速减少,疤痕组织替代正常组织结构,心室发生退行性重塑,心肌泵血功能下降,导致心力衰竭。近几年干细胞研究逐步深入,细胞移植被认为是一种极具临床应用前景的治疗缺血性心脏病的再生医学疗法。在所有可供心肌移植的种子细胞中,脂肪源性间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)具有分化为心肌细胞的潜能、易于获得、细胞存储量大以及伦理问题少,有望成为心肌修复最理想的干细胞之一。但是,ADMSCs是非均质的细胞群,不同亚群生物学特性的差异在一定程度影响ADMSCs的应用效果。因此,研究ADMSCs不同亚群的生物学特性、筛选向心肌分化的优势亚群,对加大研究针对性和提高临床疗效具有十分重要的意义。目的以CD73为分选标准,分离、纯化CD73阳性和CD73阴性的ADMSCs,研究两个亚群的生物学特性和向心肌分化、脂肪细胞分化、骨细胞分化潜能的差异,筛选出心肌分化优势亚群,为进一步开展细胞治疗心肌疾患提供实验参考。方法1.流式细胞仪分选CD73+/CD73-ADMSCs亚群,HE染色观测其形态,免疫荧光化学法检测亚群的间充质干细胞表面标记CD73、CD90和CD105的表达。2.5-aza诱导CD73+/CD73-ADMSCs亚群,细胞免疫荧光化学法检测心肌特异性蛋白心肌肌钙蛋白c-TnT, Real-time PCR检测c-TnT、Gata-4基因水平变化。3.成脂肪诱导剂诱导CD73+/CD73-ADMSCs亚群,油红O检测成脂肪细胞分化情况,分光光度计检测评价亚群的成脂肪细胞分化能力。4.成骨诱导剂诱导CD73+/CD73-ADMSCs亚群,茜素红检测成骨细胞分化情况,Real-time PCR检测骨细胞OST和RUNX2基因水平变化。结果1.流式细胞仪分选出CD73阳性和CD73阴性的ADMSCs, CD73-细胞以宽大扁平或方形细胞为主,表达CD105和CD90、不表达CD73；而CD73+ADMSCs主要是小细胞,形态特点呈细长形、三角形、星状或纺锤状,表达CD90、CD105和CD73。2.成心肌诱导后,CD73+ADMSCs心肌特异性c-TnT表达率45.6%、CD73亚群5.3%,基因水平上CD73+亚群也较阴性亚群高表达c-TnT、Gata-4(P0.01)。3.成脂肪细胞诱导后,CD73+ADMSCs与CD73-亚群油红O染色均显示阳性,差异无统计学意义（P0.05)。4.成骨细胞诱导后,CD73+ADMSCs与CD73-亚群茜素红染色均显示阳性,表达骨细胞特异性OST和RUNX2基因,差异无统计学意义（P0.05)。结论1.CD73+ADMSCs形态以小细胞为主,表达CD90、CD 105和CD73；而CD73-细胞主多为大细胞,表达CD105和CD90、不表达CD73。2.CD73+/+CD73-两个亚群均具有成骨、成脂和成心肌的分化能力,CD73+ADMSCs较CD73-ADMSCs在体外具有更高地向心肌分化的潜能,成骨和成脂分化定量上差异无统计学意义,提示CD73+ADMSCs具有更好的心肌治疗前景。
【关键词】：
【学位授予单位】：新乡医学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2015【分类号】：R541【目录】：
摘要5-7Abstract7-10前言10-12材料与方法12-22结果22-31讨论31-34小结34-35参考文献35-40综述：心脏再生的研究进展40-63 参考文献56-63附录63-64攻读学位期间发表文章情况64-65致谢65-66个人简历66
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中国硕士学位论文全文数据库
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