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蔡会芳 （经理）
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告知来自中国化工仪器网
商铺网址：
公司网站：
产品型号：5×RNA Loading Buffer
产品价格：1元
厂商性质：3
所在地：北京市
发布时间： 13:37:01
浏览次数：743
5&RNA&Loading&Buffer，索莱宝上样缓冲液，R1050&含溴酚兰、二甲苯青和甘油等，DEPC处理水配制，RNase-free。按4ul样品加1ul&Buffer，混匀直接上样。R1050&&5&RNA&Loading&Buffer&&&1ml&&&50.00&&北京索莱宝公司欢迎您咨询咨询电话：010-&&&&&QQ：&&&联系人：蔡会芳&&&&&&&&&Email：产品信息长期有效
&250ul（10uM）
&250ul（10uM）
&250ul（10uM）
&250ul（10uM）
&Oligo&T16
&250ul（10uM）
通用RT-PCR试剂盒（M-MLV）
通用RT-PCR试剂盒（AMV）
DNA&Marker
MarkerⅠDNA&Ladder
MarkerⅡDNA&Ladder
MarkerⅢDNA&Ladder
50bp&DNA&Ladder
100bp&DNA&Ladder
100bp&plus&DNA&Ladder
250bp&DNA&Ladder
D2000&DNA&Ladder
D2000&plus&DNA&Ladder
1kb&DNA&Ladder
1kb&plus&DNA&Ladder
DL15000&DNA&Ladder
核酸电泳相关试剂
5&TBE&缓冲液
50&TAE&缓冲液
10&MOPS&缓冲液
100ml/500ml
GoldView&I型核酸染色剂（10000&）
GoldView&II型核酸染色剂（5000&）
SYBR&Green&I核酸染色剂（10000&）
50ul/100ul
SYBR&Green&II核酸染色剂（10000&）
50ul/100ul
40%丙烯酰胺（19:1）
100ml/500ml
6&DNA&Lodding&Buffer
10*DNA上样缓冲液
5&RNA&Loading&Buffer&
鲑鱼精DNA&10mg/ml
50&Denhardt溶液
20&SSC&PH7.0
100ml/500ml
20&SSC&PH7.4
100ml/500ml
20&SSC&PH5.3
100ml/500ml
20&SSPE&PH7.4
块速连接酶
快速连接试剂盒（T4连接酶）
北京索莱宝科技有限公司主营产品：G-418遗传霉素,Insulin牛胰岛素,Phytagel plantcell植物凝胶,酵母质粒提取试剂盒,RNAsaver（RNA长效保存液）
地址：北京市通州区景盛南四街15号联东U谷85A三层联系电话：86-010-手机：传真：86-010-
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之前我们医院实验室里western始终出不了结果，蛋白带非常乱，背景一片混乱，做细胞时还好一点，跑组织榈根本是乱七八糟，当时找原因，几乎把western的每一步都进行了排查，可结果一直不理想$ x+ E- q: Y7 ]. N+ s' |1 B2 ?) m* R2 ]
后来，无意中我用相同的样本，在别家医院实验室做，结果很好，于是，就怀疑到了loading buffer中的belta 巯基乙醇上面，原来，我这个实验室的一个博后，半年前一次性的配了一大瓶的loading buffer，其中加了belta巯基乙醇，一般来说，loading buffer都是室温保存的，所以他们也没有放入到冰箱里，但其实，belta 巯基乙醇有很大挥发性，应当现用现配，就算是室温保存，也不应当超过30天，超过30天后应当再补充，这位博后配了这一大瓶loading buffer之后立即就加了belta 巯基乙醇，但很长时间没人用，当实验室里人开始做western blotting的时候，又没有及时补充belta 巯基乙醇，也没有加DTT等其它还原剂，而且loading buffer每次用量很少，这一大瓶所有人都在用，但没人想到此时的belta 巯基乙醇已经挥发的差不多了，所以几乎没人能跑出很好的带来
" V7 R! B: J# V$ C, Q" `
我重新配了新的loading buffer之后，大家这一段时间以来结果都不错，经过这件事情，深刻感受到了实验真是差一点都不行啊，一个小环节出现问题，就可能导致整个实验失败4 _& h0 E" j( y# B, H: V
我现在加了belta 巯基乙醇的loading buffer，都保存到－20，这样保存时间应当会延长很久了
- d* z# P7 ]7 T: O&&x5 l+ B
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回复 8 Q5 B6 _( a" {! ~2 R. _
! y8 B! `" r$ `&&y2 E
其实只要密封得好，放室温也没问题的。我自己配的就是配好5xloading buffer w/o reducing reagent。一次拿1mL出来加还原剂，用个3个月没啥问题。放低温SDS会释出，每次都要加温很麻烦，感觉反而会加速还原剂的降解。
另外beta-ME这东西见光分解，要放暗格是真的。
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分子克隆高手，欢迎提问
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! j* L* W! ?( |, U&&Y$ p: I: _) ^
我们实验室都是配好后分装，放在-20的
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嗯 还是配制好进行分装，-20保存为好，用时提前室温融解
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回复 ! e$ y' I5 G% w( d( t2 f* T. _
, l$ O0 m5 \% B! ]* K
不用煮一下吗？觉得直接加的话还是有点粘稠！
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Powered by请问跑SDS-PAGE时，loading buffer什么时间加入好？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 请问跑SDS-PAGE时，loading buffer什么时间加入好？
摘要: [请问跑SDS-PAGE时，loading buffer什么时间加入好？] 1 请问跑SDS-PAGE时，loading buffer什么时间加入好？是先和蛋白样品混合后再加热上样？还是蛋白样品先单独加热变性后再加入loading buffer上样？2 顺便问一下5%的浓缩胶和12%的分离胶在室温下多久凝聚是正常的？请各位多多指教！ 关键词:[SDS-PAGE 浓缩胶 等体积 分离胶 蛋白质 蛋白浓度 蛋白样品 复合物]……
1.请问跑-PAGE时，loading buffer什么时间加入好？是先和蛋白样品混合后再加热上样？还是蛋白样品先单独加热变性后再加入loading buffer上样？
2.顺便问一下5%的浓缩胶和12%的分离胶在室温下多久凝聚是正常的？
请各位多多指教！回复
1.loading buffer应该在加样前与蛋白等体积混匀,然后煮样5分钟,先单独加热变性蛋白样品后再加入loading buffer上样是错误的操作方法
2. 5%的浓缩胶和12%的分离胶在室温下十几分钟到半小时内凝固都是正常的,冬天半小时后凝固也是正常的
请教，loading buffer与蛋白等体积混匀吗？好像是按蛋白与的比值来加的吧。
不一定是等体积混合，他说的那种是预先配制的2× buffer，这种就是一份样品加一份buffer，有1×，4×等多种配制浓度，不同浓度添加比例都不一致，最终使你的混合液变成1×就对了。
buffer、样品溶液是混合后再加热的，这是使SDS和蛋白质充分结合形成复合物的一个过程，且SDS相对蛋白质必需过量添加，结合不充分会对后面结果造成干扰。
楼上的解释很合理哈，那如果样品浓度很低，而梳孔的上样量有限，可不可以不稀释成1×的呢，以保证SDS过量？
1×一般用于直接添加干粉样品，为了保证电泳的检测灵敏度想增加样品上样量，那可以选择4×的（同样上样量可以加3份样品，1份buffer，那么样品上样量就提高了）。但如果样品浓度过低也就没意义了，杂蛋白都不能检出（药典上对上样量是有要求的）浓度不足的话，得想办法把样品浓缩再检测。可控制蛋白浓度以保证SDS过量，SDS一般是高于蛋白质量的3～4倍就可以了。
等体积好像不是很好把，我一般是1：4，不过我的1× buffer的
最好估计蛋白质的ug数，以便个上样孔蛋白质等量。1XBUFFER 对各孔一样等体积加入， 再煮沸2-3分钟，冷却3分钟，加人样品孔。
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等体积好像不是很好把，我一般是1：4，不过我的1× buffer的
蛋白浓度低要用高浓度的buffer，比如5X的
样品少可以用2X的，这样在煮样时就可以防止煮干或挂壁损失
蛋白浓度低要用高浓度的buffer，比如5X的
样品少可以用2X的，这样在煮样时就可以防止煮干或挂壁损失 样品少可以用2X的，这样在煮样时就可以防止煮干或挂壁损失
样品加入eppendorf 管，盖好并用特制的盖夹固定，煮1-3分钟，不用担心煮干或挂壁损失，由于1XBUFF 含有蔗糖等物质。
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样品少可以用2X的，这样在煮样时就可以防止
煮沸之前加loading buffer, 我们用4×的，加的量是样品量的1/3，涡旋混匀，然后封口胶封好，放入固定板中，沸水中煮3min就可以了。封口胶封住后不用担心水蒸气进去。之前说的固定板，其实很简单，就用泡沫塑料什么的弄几个洞，把EP管插进去就行了。另外，一个很简单的思路，关于loading buffer先加还是后加的问题，如果后加，buffer还有什么用呢，蛋白加热煮沸，不就和煮鸡蛋一样了吗，呵呵，这是我原来犯过的错误Smile
12%的分离胶，因气温的不同凝胶时间不同，有一个简单的方法，正丁纯封胶后，如果分离胶凝固好了，会在胶与正丁纯间有一明显的介面。
5％浓缩胶，比分离胶时间要快，可以根据剩下的浓缩胶来看，观查中浓缩胶是否凝固，以判断，就是说如果中的浓缩胶凝固好了，那么制胶也就可以了。
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6×loading_buffer(RT201)
厂家：天根生化科技（北京）有限公司
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