丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12与HCV含量变化及相关性研究
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丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12与HCV含量变化及相关性研究
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摘要：目的：探讨丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12水平的变化以及在丙型肝炎发病机制中的作用。方法：分别应用ELISA法检测52例丙型肝炎患者(其中轻度18例，中度19例，重度15例)血清的IL-6、IL-12浓度，荧光定量PCR检测HCV RNA含量，同时测定ALT水平，然后分析它们之间的关系，并与15名正常健康人作对照。结果：丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12、ALT和HCV RNA水平均非常显著地高于正常对照组（P&0.01），相关性分析表明，丙型肝炎患者血清中的ALT、HCV病毒含量均与IL-6、IL-12浓度呈正相关。结论：丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12水平高低与HCV病毒含量有关，并且与肝脏的损伤程度密切相关。
　　关键词：& 丙型肝炎；& 白细胞介素-6；& 白细胞介素-12；& 转氨酶
　　The Research of Relationship between Serum IL-6, IL-12 Levels and HCV Content in Patients with HCV Infection
　　Abstract:Objective:& To explore the changes of serum IL-6, IL-12 levels in patients with hepatitis C and the role of IL-6, IL-12 in pathogenesy of hepatitis C. Method： Levels of serum IL-6 and IL-12 were detected by ELISA, contents of HCV RNA by fluorescent quantitation PCR in 52 cases hepatitis C and 15normal controls. Levels of ALT were measured in the same time. Result： Serum levels of IL-6, IL-12, ALT and HCV virus were higher than those in normal controls(P&0.01). there were positive correlation between serum levels of IL-6, IL-12 and contents of ALT and HCV. Conclusion： The serum levels of Il-6, Il-12 in patients with hepatitis C were related to HCV content. Their levels were also related to immune function injury degree of liver.
　　Key words:& Hepatitis C;& Interleukin-6;& Interleukin-12;& Aminopherase
　　本研究拟通过对52例丙型肝炎患者血清中细胞因子IL-6、IL-12、谷丙转氨酶（ALT）和HCV病毒RNA含量的检测，并对它们进行相关性分析，探讨细胞因子在HC发病过程中的作用。
　　1& 材料和方法
　　1.1& 研究对象：丙型肝炎组选择广东医学院附属医院传染科HC患者52例(其中轻度18例，中度19例，重度15例)，其诊断标准符合1995年第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准，其中男27例，女25例，平均年龄42.6岁。所有患者HCV IgG阳性，血清HCV RNA阳性，并排除其它病毒性肝炎、自身免疫性疾病及代谢性疾病，未经干扰素及免疫抑制剂治疗。正常对照组为15例（男8例，女7例），平均年龄39.5岁，均为我院保健科体检合格的健康人，均无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患，肝、肾功能正常，乙型肝炎病毒标志物和丙型肝炎标志物检测均为阴性。
　　1.2& 试剂和仪器：IL-6、IL-10 ELISA试剂盒分别由北京华美公司和武汉伯士德生物工程公司提供；定量PCR试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供，用于HCV病毒含量测定；RT-200C型全自动生化分析仪为美国杜雷公司产品；Opticon实时荧光定量PCR仪为MJ Research公司产品。
　　1.3& 方法：分别采集各实验对象静脉血5ml，静置1H后2500rpm离心10min，取上层血清，用于测定血清的细胞因子IL-6、IL-12、ALT和HCV病毒RNA含量的检测。
　　1.3.1& HCV RNA测定：150&L血清中加入150&L裂解液，混匀，加入50&L氯仿，13000rpm离心15min，取上清，加入100&L异丙酚，13000 rpm离心10min，加入20&L DEPC水，轻轻混匀。向毛细管分别加入15&L RNA溶液，8.8&L的RT-PCR反应液，0.2&L的PCR Enhancer，于荧光PCR仪中进行检测。
　　1.3.2& ALT及细胞因子的检测：以全自动生化分析仪测血清中的ALT水平；分别按各试剂盒说明书测血清中HCV IgG抗体、IL-6、IL-12的含量。
　　1.4& 统计学处理：所测数据以&S表示。用SPSS11.0统计软件进行分析，组间比较运用t检验；IL-6、IL-12水平与HCV病毒含量及ALT的相关分析用直线相关性分析，用相关系数(r)表示。
　　2& 结果　　　　实验结果表明（见表1），和正常对照组比较，52例HC患者血清IL-6、IL-12、ALT和HCV RNA含量均显著上升（P&0.01），并且随着病情的加重其含量逐渐递增。相关性分析显示（见表2）， 52例HC患者ALT含量与HCV病毒含量、IL-6及IL-12水平均呈正相关（P&0.01）。而HC患者的HCV病毒含量也与IL-6和IL-12水平呈正相关（P&0.01）。
　　表1& 正常人和丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12和ALT、HCV RNA含量（略）
　　与正常组比较，** P&0.01
　　表2& 丙型肝炎患者血清和ALT、HCV 病毒的相关系数（略）
　　3& 讨论　　　　丙型肝炎的发病机制目前虽尚不十分清楚，但近年来众多的研究表明，免疫因素尤其是细胞免疫异常可能是丙型肝炎发病的重要机制，而且细胞因子在其中起着重要的作用。研究表明丙型肝炎的发病过程中肝炎病毒感染使机体免疫系统活化，产生或释放过量的细胞因子如TNF-&、IL-6和IL-12等［1］。另外，病毒复制，内毒素血症又使单核巨噬细胞处于激活状态，促进IL-6和TNF-&分泌大量增加，IL-6和TNF-&反过来又激活T、B细胞，NK细胞和单核细胞，这些活化的细胞可与因肝炎病毒感染而改变肝细胞膜成分发生免疫应答，因而造成肝功的改变和肝细胞的坏死。
　　　　过量表达的IL-6由活化的淋巴细胞、患者的内毒素血症激发单核巨噬细胞产生，其可促进B细胞分化，增强穿孔素基因、IL-2、IL-2R的表达，加速肝脏急性期蛋白的合成和释放，介导肝细胞大量死亡［2］。另外IL-6还能诱导CTL产生更多的丝氨酸脂酶和穿孔素，导致大量离子和水份进入引起肝细胞肿胀、破裂死亡。IL-6还可以介导自身免疫反应，参与针对肝细胞的自身免疫，从而加重了肝细胞的破坏［3］。而IL-12主要由活化的巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞产生，能增加NK细胞活性，增加NK细胞与靶细胞的结合力，增强清除HCV活性，但同时也导致免疫损伤［4］，表现为介导肝细胞大量坏死，反映在机体血清ALT水平的升高。有文献报道：重组人白细胞介素-12（rhIL-12）可在体外显著增加慢性HCV感染者淋巴细胞的增殖反应，亦能显著增强HCV感染者对HCV抗原的增殖反应［5］。本实验结果显示丙型肝炎患者组血清IL-6和IL-12水平均显著高于正常对照组（P&0.01），实验数据还显示IL-6 和IL-12与血清ALT水平明显相关，表明丙型肝炎患者体内产生过量的IL-6和IL-12，导致免疫损伤，使肝细胞受损，致使ALT水平的升高。提示IL-6 和IL-12对丙型肝炎的病情轻重与预后判断有一定的指导意义。　　　　HCV属黄病毒属，为单股正链RNA病毒，HCV感染可引起肝脏病变慢性化及肝硬化，同时与原发性肝癌的发生也有密切的关系［6］。丙型肝炎的病理改变主要是肝细胞坏死和淋巴细胞浸润，病理改变提示，HCV的致病机制并非病毒的直接致细胞病变作用，而免疫介导的损伤可能是肝脏病变的主要原因。研究表明在病理情况下由于肝炎病毒的侵袭，致使机体的细胞因子调节功能失衡，从而使细胞因子含量发生改变，并随其含量的增高可引起局部炎症反应而造成多器官、多系统的损伤［7］。另有文献报道HCV非结构蛋白虽然不是病毒的结构成分，但具有一定的免疫原性，可诱导免疫细胞的增殖，可能免疫导致IL-12分泌增加，导致肝炎的发生。我们研究发现丙型肝炎患者血清HCV病毒含量与IL-6 、IL-12、ALT水平均呈正相关，表明HCV病毒感染诱导IL-6 、IL-12的大量增加，导致肝细胞损害。 &&& 　　综上所述，细胞因子IL-6、IL-12与肝细胞的炎症反应关系密切。HCV感染人体可以诱导机体IL-6、IL-12水平的显著升高，进而介导肝细胞的损伤。HCV基因产物的高水平表达可能提高了细胞对细胞因子或其他肝细胞破坏介质的敏感性。而在慢性丙型肝炎的发病机制中，免疫损伤可能是其重要原因之一。
　　参考文献：
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　　［2］& Allander T, Forns X, Emerson SU,et al.& Hepatitis C Virus envelope protein E2 to CD81 of tamarins［Ｊ］.Virology ,):258-267．
　　［3］& 骆抗先．乙型肝炎的基础与临床［Ｍ］．第1版．北京:人民卫生出版社．．
　　［4］& Sakaguchi E, Kayano K,Segaawa M, et al. Th1/Th2 imbalance in HCV-related liver cirrhosis［Ｊ］． Nippon Rinsho,)：.
　　［5］& Ｆan XG, Tang FQ, Yi h, et al. Effect of IL-12 on T-cell immune responses in patients with chronic HCV infection［Ｊ］. APMIS,):531-538.
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