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寡核苷酸的具体定义是什么？
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在经过消化后的核酸片段中加入32P-ATP和T4多核苷酸激酶，加1?g病毒RNA：于上述酶消化溶液中加入35，加入2;LTris－硼酸，尽管这3株毒株是从3个不同鸡群分离出的，因此，根据所作记号与Ⅰ相凝胶对齐。该法最大优点为比较简便，电泳至溴酚蓝泳动20cm时停止电泳.2条件下.5(根据统计学假定;L 酵母RNA 100mg 10mg&#47，加入2，通过自显影，可产生大小不同的片段，通过适当的酶切，可根据片段长短的不同将其分开，快速置冰浴中冷却;V) EDTA 2mg 50m mol&#47，乘以系数1，借此对不同的病毒株的核酸进行分析比较。(2) 第Ⅱ相电泳 将Ⅰ相的底片，特异性地作用于鸟嘌呤核苷酸的3’磷酸基团，增长了，混合后置37℃水浴30分钟，最终产物为带3’磷酸鸟嘌呤末端的寡核苷酸。并发现在这两个地理位置上相隔较远的国家，这对在自然条件下容易变异的病毒是很有价值的.5＋2＝8，指纹图谱也有差异，少数较大分子量的酶切核酸片段在聚丙烯酰胺凝胶上分布特点的比较.5 Tris-HCl，冲洗后底片上应见到从小到大的糖葫芦状黑点.6％。4，能显示出核酸间细小的差别。即将两个毒株的32P－ATP标记核酸等量混合，用12000r&#47，即在病毒培养液中加入32P－正磷酸盐或32P－ATP.核糖核酸酶切和同位素标记 常用的酶是T1核糖核酸酶(故该技术又称为T1－寡核苷酸指纹图谱)?l去离子水.6mol&#47，然后于暗室取出底片冲洗，图谱明显不同，置沸水中煮60-90秒，可推测两毒株核酸的同源性?lTSE饱和酚，但缺点是无法对差别大的两条来源不同的核酸进行比较.G。两个或两个以上毒株比较时，如某一点为两毒株共有的，4×1、轮状病毒等的研究?l激酶缓冲液(10mmol&#47，就在相应位置上出现一个点，置37℃消化30-40分钟，泳出了11种不同的寡核苷酸指纹图谱，用滤纸将胶条残余水吸干.5倍冷无水乙醇.74g 最终浓度0.6g 6mol&#47，方法与第Ⅰ相显影相同，RNA基因组碱基变异频率大约为每年0;L NaCl 8，但可以明显地区别开，摆好间条.8的TSE缓冲液，混合后置37℃水浴30-40分钟; L Mg(OAC)2;ml 加无离子水至10ml
(1) 第Ⅰ相电泳 将玻璃板(20×39cm)及梳子清洗干净，即大片段点增加是由小片段点改变而来.5时为蓝色，而其他毒株没有;L 用1N HCl(约12ml)调pH至7。(二) 基本方法
1；另一种为联苯胺(XyleneCyanol，加1，0。70年代后期分离的6株在血清型上和基因型上都与疫苗株(H52和H120)无关.反应终止及寡核苷酸的提取 于上述反应物中加入100。其分析结果有时被仲裁机构作为处理经济纠纷的依据，那么它们之间鸟嘌呤碱基改变的最少数应为，表示片段增加、V1385 ，这种酶是一种RNA限制酶.325％甲叉双丙烯酰胺注胶。目前该种方法已在病毒学研究中得到了广泛的应用，丢失了多少点.1mol&#47，当溴酚蓝运行20cm时。不同血清型的毒株;3处斑点进行比较；凡标准株没有的点，取上层水相。外标记方法为，混合，长条长约20cm(从指示剂XC上端8cm，该技术还应用于口蹄疫病毒，在X光底片上放一块比底片稍大的增强板，1mmol/L EDTA )。 将上述终止后的溶液。从理论上讲，2mmol&#47、水泡性口炎病毒，结果表明、鉴定病毒遗传变异等： Tris 2、同一地区分离的毒株则极为相似，停止电泳.8％甲叉双丙烯酰胺，增加了4个点，pH8，而寡核苷酸指纹图谱技术可以进一步区别它们，泳动方向为由Ⅰ相胶条端向另一端泳动，其余的为比较株，特别是对RNA病毒分类，沿着点的两边切出约1cm宽的长条;L醋酸氨配成2mg&#47.15mol&#47。最好使用分辨率较高的核子乳胶片，在pH3，并证实1977年毒株是年毒株的前身四十个碱基以内，而同一血清型的不同毒株、V1397是疫苗株H52和H120的突变株。在电泳中一般采用两种指示剂。将丢失和增加点数相加除以2，须进行混合电泳、禽反转录病毒，切下的胶条放在准备好的玻璃板上，将制备好的干燥核酸片段加20。Clewley等对分离的13株传染性支气管炎病毒进行研究;L 蔗
10％(W&#47，用10％丙烯酰胺，但它们的寡核苷酸指纹图谱却几乎相同，置4℃自显影1-2小时，有的点可能从胶两旁跑掉，简称XC)，进行垂直双相电泳。另一种方法是外标记(又称末端标记)。除上述病毒外。(一) 原理 提纯后的病毒核酸，pH3.8，表示片段丢失.1％ 尿
素 3，有的点可能重叠，10m mol&#47，轻摇混合后， 双链分离;min离心3分钟，有些病毒也可用鸡胚进行繁殖，以饱和酚法提纯病毒核酸，弃上清。结果表明，在4℃预电泳30-60分钟后.77g 最终浓度0。待凝胶凝聚后。Karaca等对3株分离自肠道的传染性支气管炎病毒进行研究后认为，补无离子水至1000ml。2。标记的方法有两种.5mmol&#47，其大小相当于25个核苷酸，因此又称为指纹图分析(Analysisof fingerprint map)，从上到下进行第一相电泳，6mol&#47，其后在pH8，可得到特征性的图谱?l2倍浓缩的消化缓冲液( 40m mol&#47，用以表示毒株的大致关系，摆直放平。XC标记周围约50－70个点为重点比较区，而5’末端就暴露出羟基团.等对12株分离自荷兰的传染性支气管炎病毒进行寡核苷酸指纹图谱分析。Hori等用该技术分析了年从日本和泰国分离的12株日本脑炎病毒的核酸基因组，片段的大小与鸟苷酸的含量有关，这些毒株的基因组很相似，敏感性高，干燥沉淀物(即核酸)，多取图谱下端或整个图的下1/mmol)，故此认为这3株病毒是由Connecticut毒株的基因突变而来的，点丢失的最高数与增加数是对等的，在流行病学调查中具有重要意义，否则出现两个点，在某些情况下可鉴定病毒亚型，使增殖的病毒中带有32P.病毒的增殖与核酸的提纯 用适当的组织培养细胞繁殖病毒。凝胶浓度为21;L EDTA(Na2) 0，显影时间取决于同位素强度和实验目的.42g 最终浓度0.8％丙烯酰胺;;L柠檬酸，在pH8，高压消毒，在pH3.5?l32P-ATP(比活性5000Ci&#47，J，且与Conn－46株的指纹图谱很相似，进行垂直式电泳，50％可能是各自突变而来)。(三) 结果分析 在Ⅱ相胶自显影前先观察XC和BPB两个指示剂的距离(应与Ⅰ相胶条中一样)。由于12-14个碱基以上的核苷酸片段特异性高.电泳及自显影 指示染料的配制，10，蓝舌病毒; LTris－HCl，混合置-20℃过夜或-70℃30分钟：于Eppendorf管中加入1。郭元吉等从我国猪群中分离到1株丙型流感病毒;ml的酵母RNA)终止激酶作用，而BPB周围点一般仅作参考。Kusters，并提出第一组中的3个分离株V1259。最后统计出共增加了多少点，固定两层玻板后即可灌胶。pH7，它的大小相当于8-10个核苷酸， 其中一条连有biotin。消化步骤为，于暗室中将X光底片放在胶面的玻璃纸上，再经放射自显影，并且在相近的年份分离的毒株相似率更高；也可能是由以前的毒株演变而来;L DTT)，经放射性同位素标记(或在病毒培养时标记)后，切割与其邻近核苷酸相连的5’磷酯键：以10ml为例 溴酚兰 10mg 终浓度。在pH3：一种为溴酚蓝(BPB)，电泳缓冲液为0，再加入中止混合物(用0，至下端12cm).5条件下，依片段所带电荷的不同将其分开，2;L尿素，结果将它们分为两组。如距离太小，结果表明，并发现某些分离物是疫苗株的突变种，图谱上部的斑点由于片段较小难以进行分析.2时为绿色，这种成对改变50％是由于单一点改变而来，分离株之间基因组同源性较强，进行比较，从右到左进行第二相电泳?l)，便可在底片上看到片段的位置和数目，如一个毒株与另一毒株相比时.5时呈绿色.002mol&#47，电泳缓冲液为25mmol/min离心15分钟：一是内标记.2时呈蓝色，即寡核苷酸指纹图谱，如同根据指纹特点判断案情一样，一般取50-70个斑点，用黑纸包好以免透光。因为它是通过少数核酸片段来了解整个核酸的特征，用寡核苷酸指纹图谱分析证明。经消化后的核酸变为大小不等的片段。从而可检查出自然界呼肠孤病毒基因组的变异情况和监测其进化程度;L pH7，用32P－ATP标记寡核苷酸的5’末端，丢失6个点，以标记片段5’端。为证实某一或某数点是否是某毒株核酸独有的，即每断片的3’末端为鸟嘌呤并带有磷酸，加上不成对的点数即成对后剩下的数，而其他毒株出现了，太短的片段特异性低。 3，将该酶与病毒RNA以一定比例混合。然后在T4多核苷酸激酶的作用下：0，其中5株与疫苗株的图谱非常相似.1％ 联苯胺 10mg 0。凡标准株寡核苷酸图中出现的点、胶面朝上，所有的日本毒株都有某些共同的斑点，方向为从上到下?l指示染料溶解混匀点样。此时可取下凝胶的一块玻璃板。Rekik等对8株分离的禽呼肠孤病毒和1株S1133疫苗株进行寡核苷酸指纹图谱分析。取下凝胶进行自显影，它周围的点为重点观察区，将另一块玻璃擦洗干净盖在增强板上。所用的酶一般是T1核糖核酸酶，0;L EDTA。凝胶聚合后直接在室温下进行电泳?l T4多核苷酸激酶.3，11 000r&#47，用玻璃纸将胶包住。因此根据两个毒株的图谱中点的相似情况以及斑点消失和增加数目。(四) 应用 形态学和血清学的方法可用于鉴定病毒的血清型，日本脑炎病毒经历了各自不同的基因突变和选择过程，但不能区别同一血清型或亚型的不同病毒株和分离物，说明是自然突变株，最后用饱和酚和酵母RNA混合液终止激酶的作用。在同一年份，该株病毒可能是在我国猪群中存在的一种新的丙型流感病毒、脊髓灰质炎病毒。白植生等用该技术检查16株年的甲3型流感病毒，pH8、马脑脊髓炎病毒,
1umol左右 末端是氨基 寡核苷酸图谱分析是指核酸或核酸片段经T1核酸酶切割后电泳，常以其中一株为标准株，1.4％－0，并且推测是决定血清型的S1蛋白基因突变所致.02mol&#47，与非混合样品同时进行电泳，放上另一准备好的玻璃板?lT1酶(5IU&#47
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珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊：获世博会创新品牌殊荣
作者：汪中华/文
国际创新制造杰出贡献奖
行业十大创新品牌　　在上海世博会DEVNET馆“国际制造创新节”上，由北海市巨欣生物科技有限公司生产的珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊等40余个中国创新制造的品牌喜获“2010年上海世博会国际制造行业十大创新品牌”。该奖项由联合国开发计划署执行机构―――国际信息发展组织、上海世博会DE－VNET馆、环球商会联盟筹委会、中国制造厂商协会联合颁发。参加该颁奖仪式的有全国人大等国家及部委领导人、30多个国家的代表、国内知名企业代表及30余家新闻媒体记者。　　珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊产品是本次“国际制造创新节”最为引人关注的获奖产品，在获选“2010年上海世博会国际制造行业十大创新品牌”的产品中，北海市巨欣生物科技有限公司的创新程度和前沿科技成果的创新应用均居于领先地位，被授予“2010年上海世博会国际创新制造杰出贡献奖”，是本次评选活动中惟一获此殊荣的企业。该产品以其特有的生物高科技组方，自问世以来，历经三年的市场推广，以其增强人体免疫力和对心脑血管疾病辅助治疗的显著效果，赢得了众多中老年朋友的青睐，使巨欣公司快速成长为保健品行业的佼佼者，已连年取得全国市场同类产品销量增长领先的佳绩，昂首跨入了行业第一集团军的行列。该产品还先后获得“全国消费市场放心保真产品”、“中国消费者满意名特优品牌”、“中国科技创新重点保护品牌”等殊荣。借2009年诺贝尔生理或医学奖、化学奖公布的东风，珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊在国内市场更是声名鹊起，赢得了更广泛的国内外专家、学者的一致推崇，成为我国比肩世界高科技核酸产品的一面旗帜。　　千病万病都是基因病，早已成为生命科学、生物科学、基因科学的共识。北海市巨欣生物科技有限公司以中国国务院及国家发改委制定的相关政策为指南，珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊的研发者们遵循着2009年诺贝尔生理或医学奖、化学奖的成果足迹，对新一代的寡核苷酸产品进行靶向研发。靶向一：2009年诺贝尔生理或医学奖对人类的伟大贡献，在于发现了基因的根源、基因的“心脏”，那就是染色体末端的冒状结构―――端粒。端粒起着稳定基因结构、调控生命时钟的作用。而营养、激活、修复端粒的物质就是端粒酶。研究成果表明：端粒酶的直接合成原料是寡核苷酸，而端粒酶用于合成端粒的直接合成原料是脱氧核苷酸。所以，升级换代的核酸产品一定要同时含有脱氧核苷酸和寡核苷酸。靶向二：2009年诺贝尔化学奖的研究成果是利用X光晶体学的技术，展示出了核糖体这个“蛋白加工厂”的三维结构，并在原子水平上揭示了它的工作原理。该研究成果显示，只有小分子的核酸才能够直接参与基因的表达和制造功能蛋白质的工作。因此，升级换代的寡核苷酸产品，一定要把小分子的核苷酸含量尽可能的提高。靶向三：依据2009年诺贝尔化学奖的研究成果结合生物中心法则，功能蛋白质决定细胞的合成和指挥生成生命所需的全部化学物质。问题是，新的细胞孕育生成后，如果不能及时跟进补充细胞生长发育所需的营养物质，细胞的死亡率也会上升。因此，升级换代的核酸产品还应该含有细胞必需的营养成分才比较完善。三个靶向涉及到了三种因子―――脱氧核苷酸、寡核苷酸、细胞营养素，珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊的研发是完全依照2009年诺贝尔生理或医学奖、化学奖的成果进行针对性的靶向研发的，最终实现了“三联因子”功能互补、强强联合的完美结局。　　引用韩忠曙教授在CCTV对人体基因图谱破译时的讲座，能更为准确和科学地描述珍福泰（“三联因子”寡核苷酸）胶囊产品对人体的作用。　　碱基对存在于由碱基、戊糖、磷酸等小分子物质构成的核苷酸链中，核苷酸在人体内起到营养、修复衰老及受损基因的作用，激发细胞潜在的活性，并能使细胞基因自主修复功能得到恢复。　　同时，由一些残缺核苷酸片段通过磷酸二酯键连接而成的寡核苷酸，作用更为重要。它像一个卫兵，随时监视并识别基因的突变，及时杀死变异细胞，快速吞噬病毒细胞，阻止病毒基因的转录和翻译，阻断病毒复制。　　通过基因组序列图，研究者还发现了寡核苷酸的另一重大作用，它能有效干扰多耐药基因MDR-1，从而提高疾病对药物的敏感性，并有效化解药物的毒副作用，对糖尿病、心脑血管等疾病有很好的辅助治疗作用。　　日，“2010年度中国企业十大新闻人物”在北京人民大会堂揭晓，吉利集团董事长李书福、巨欣生物董事长张竟等人入选。随即公司又荣获了“全国质量诚信AAAAA级品牌企业”等荣誉称号。　　荣誉已成过去，发展才是硬道理。如今，北海市巨欣生物科技有限公司正在以“一万年太久，只争朝夕”的精神，向寡核苷酸产业更高、更尖端的科技领域挺进，力争再一次以升级换代的寡核苷酸产品为中国人民，特别是中老年朋友带来健康奇迹！
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反义寡核苷酸
（antisense
oligonucleotide）
反义寡核苷酸（antisense
oligonucleotide）通常指进行了某些化学修饰的短链核酸（约15-25个核苷酸组成），它的碱基顺序排列与特定的靶标RNA序列互补，进入细胞后可按照Watson-Crick碱基互补配对的原则与靶标序列形成双链结构。反义寡核苷酸与靶标基因的RNA结合后可通过各种不同的机制影响靶标基因的表达。
反义寡核苷酸可用于基因沉默，所以是一种研究基因功能的重要工具。大多数药物属于靶标基因（或疾病基因）的抑制剂，因此反义寡核苷酸模拟了药物的作用，这功能丢失（LOF)的研究方法比传统的功能获得（GOF)方法更具优势。同时，那些在靶标实验中证明有效的反义寡核苷酸本身还可以被进一步开发成为反义寡核苷酸药物。
反义寡核苷酸——新型抗菌药物的曙光
来源:医学与哲学&日期: &
1反义RNA的发现和研究历程
天然反义RNA是一类分子质量较小的多聚寡核苷酸，它们与生物体双链DNA的正义链或mRNA的一段序列互补。最早是由E.Coli体内质粒复制的调控而发现的。原核生物中反义RNA抑制基因表达的方式有三种：(1)DNA复制水平:&
反义RNA与引物前体结合，阻止正常引物的产生，使DNA复制不能进行。(2)转录水平：反义RNA与mRNA&&&
5&端结合，形成类似于转录终止信号的Ⅱ级结构；(3)翻译水平：又分为两种方式，即反义RNA与mRNA&
SD序列和/或编码起始区结合，直接抑制翻译或与mRNA非编码区结合，使mRNA分子构象发生改变而不能与核糖体结合，间接抑制翻译。反义RNA可由人工合成及反以表达载体两种方式得到。后者是利用基因重组技术，在适当的启动子和转录终止子间反向插入一段靶基因，所得到的、反义表达的RNA可抑制同源基因的表达，效果稳定、持久。人工合成的反义寡核苷酸包括反义RNA和反义DNA,&
通常由15～20个核苷酸组成，为防止细胞内核酸酶的分解作用，常将其进行化学修饰。将他们运送到靶细胞，只产生短效应，不会留下长效的遗传效应，这对于前期研究尚未探明其副作用的前提下，有较好的安全性；其用量及作用的靶序列可以人为控制，原则上不会干扰其它基因结构和它们自身正常的调控方式；尤其是反义寡核苷酸不会产生耐药性，还可采用多点反义处理增强抑制效果。反义RNA的基因沉默功能不仅可以用来研究未知基因功能，而且可用于多种疾病的治疗。自Zammeenik等首次报道以反义寡核苷酸抑制劳氏肉瘤病毒复制后，反义寡核苷酸便迅速应用于肿瘤、病毒感染、寄生虫病的研究。Liu&
song-kai等分别利用反义RNA和siRNA抑制HIV-1复制过程中所需细胞蛋白CyPA的合成，结果均明显抑制了HIV-1在人T淋巴细胞中的复制；他们认为两种方法机制不同，靶向部位不同，联合使用可增强抑制效果［１］。Ji&&&
Yinduo等通过构建针对金黄色葡萄球菌脂肪酸合成酶的反义表达载体，转染该菌后发现能抑制编码基因的表达，使其生长受到明显抑制，甚至停止［２］。
反义技术应用于临床治疗也屡有报道：如利用人工合成的反义寡核苷酸抑制C-myc等致癌基因或肿瘤生长因子的表达等。&&
2反义RNA作用的双重性&&
反义RNA不仅可以作为基因表达的负调节因子，也可以作为正调节因子。例如：mRNAⅡ级结构的形成有时会抑制其翻译，设计阻止mRNAⅡ级结构形成的反义RNA可促进基因的表达。我们知道生物体内某个基因表达不足或表达过度均会造成生物体的疾病。如细胞凋亡基因受促凋亡基因及抑凋亡基因的控制；正常表达时，在胚胎发育中可清除对机体无用的甚至有害的细胞，使组织器官结构正常、形态完整；在成年机体去除衰老、损伤、癌变的细胞，并代之以新生的细胞，以维持器官中细胞数量稳定和机体防御系统完整。若凋亡基因表达不足，导致细胞凋亡受阻，会逐步发展成肿瘤；若表达过度，则造成组织器官发育缺陷或功能降低，进而导致机体产生一系列的病变。靶向促凋亡基因的反义RNA可抑制细胞凋亡；反之，则促进细胞凋亡。由此我们可以看出，虽然反义RNA的作用是抑制同源基因的表达，但是由于靶目标的不同，抑制结果却截然相反。这就要求我们以全面系统的态度对待反义RNA。&&
3目前存在的问题及解决方法
3．1转染效率：无论是载体表达的反义RNA还是体外合成的反义寡核苷酸，只有进入靶细胞，才可与同源基因结合，发挥调节作用，而且反义RNA调节具有明显的剂量依赖性。裸露的反义寡核苷酸进入细胞是一个内化过程，效率很低；而带有极性的反义寡核苷酸则是一个主动吸收过程，效率相对较高。然而，截至目前这一问题仍是反义RNA开发应用中的最大瓶颈。细菌由于其特殊的细胞壁结构，转染效率更低于真核细胞，这也是自反义RNA发现以来，较少用于原核细胞之原因所在。分子生物学技术的发展及各种运送载体的出现和改进，如利用脂质体等介导反义分子；电转染；噬菌体运用；改造反转录病毒，使其毒性降低，继而携带反义分子进入靶细胞等方法已使转染效率明显提高。Patrick&
等用阴性电荷的脂质体包裹针对lacZ基因的反义寡核苷酸转染大肠杆菌，结果显示有57&
%的大肠杆菌整合了包裹的反义寡核苷酸（游离反义寡核苷酸的整合率几乎为零），并且测得β-半乳糖苷酶的活力下降了42%［３］。相信通过多学科联合开发，以科学哲学的方法论和系统方法为指导，这一问题最终能得到解决。
3．2靶序列的选择：许多研究结果表明：一些基因的反义沉默效果比另一些基因的好；同一基因，不同靶序列的沉默效果不同。靶序列的选择除根据上述反义寡核苷酸的作用机制外，目前一定程度上依靠经验，不能完全由分析基因组来确定。真核细胞反义RNA的研究经历了二十余年，积累了较为丰富的经验，可用来指导原核细胞反义序列的设计。为了达到抑制、杀灭细菌或阻止其致病基因表达的目的，研究者一方面应遵循系统方法论的最优化原则，选择靶基因、确定靶序列时，要统筹兼顾、整体协同，在多种方案中权衡得失，优化选择；另一方面应本着科学精神，展开科学活动，及时归纳、总结，逐步完善设计原则，推动新型抗菌药的研发，争取早日用于临床。&&
3．3给药途径：药物在机体内须达到一定的量并维持一定的时间才能发挥其药理作用。也就是说，药物首先应能耐受机体某些酶的作用而不被分解，安全抵达靶细胞，同时对非目标组织器官无毒副作用。事实上，目前尚无同时达到这两项要求的药物。俗话说：是药三分毒。&&
这就要求我们把握系统与要素、要素与要素之间的相互影响、相互制约和相互作用，把握事物整体性质及组成系统各要素间的联系，寻找最优结构，获得最佳功能。研究靶细胞的特异受体，选择具有识别性能的配体，将反义分子连接在配体上，使反义分子准确进入靶细胞就是对这一原则的最好诠释。&&
4反义RNA作为新型抗菌药物的可能性：感染性疾病是由于病源菌在体内生长、繁殖或机体正常菌群失调造成的。细菌本身的某些成份和/或生长代谢过程中产生的某些物质对特定组织器官具有毒性作用，这些毒性物质就是致病菌的毒力因子。核酸序列分析技术的迅猛发展，使探明编码毒力因子的基因序列不成问题。根据基因序列设计相应的反义RNA，借助运送载体转入细菌细胞内，抑制致病基因或编码细菌生长所必需的蛋白质基因的表达，可以达到减毒、抑制或杀灭细菌的目的。这些反义分子是最具潜能的新型抗生素。Harth等针对结核分枝杆菌致病谷氨酰胺合成酶的mRNA设计了三条硫代修饰的反义寡核苷酸，通过加入到培养液共培养，检测到其合成酶活性降低、细菌胞壁中的L-谷胺酸/谷氨酰胺的比例下降了24%，两或三种反义寡核苷酸联合使用可增强抑制效果［４］。White,D.G.等应用靶向抗生素抗性基因启动子的反义DNA类似物，经热休克和电穿孔引入E.coli，抑制了抗性基因的表达，证明外源性寡核苷酸的抑制效果［５］。还有研究者用四环素诱导载体表达反义RNA，使致病菌致病基因表达明显下降，并用鼠的急、慢性感染试验证实了这一点［６］。这些研究为将反义寡核苷酸开发成新型抗菌药物奠定了理论和实验基础。动态追踪各相关学科的发展，充分加以吸收和利用，是此研究目标不断发展、进步的基础；只有用运动、变化、发展的观点看待系统，看待要素，运用系统运动的基本规律，才能更好的认识、把握和达到研究目标。&&
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