我是western blotBlotting 新手，一个多月都没出来一张像样的图，背景总是很高，杂带太多，闹心！跪求高手指教

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2014-10-31 09:24 标签： western union
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我是Western Blotting 新手，做了一个多月了，都没出来一张像样的图，跪求高手指教！
我是Western Blotting 新手，做了一个多月了，都没出来一张像样的图，背景总是很高，杂带太多，很是闹心！跪求高手指教！以下是我的实验条件：5%BSA室温封闭4h，一抗4度孵育过夜，二抗37度1h，洗液用的是TBST，一抗二抗都是用TBST稀释的，发光底物用的Thermo的。
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一抗4度孵育,你先常温2小时，再放低温过夜，直接放进去效果不太好，而且你确定你的抗体没问题？背景过高应该是封闭的问题，也有可能是你的膜污染了杂带多通常原因是你提的不行和抗体的问题发光底物用国产的就行，你是机子拍照还是曝光
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【求助/交流】求一个western blotting一抗二抗孵育的好方法？
求一个western blotting一抗二抗孵育的好方法？
用塑料袋封口如意漏，求个好方法。
我们用名片盒 我不知道你们的一抗和二抗每次的用量是多少，有没有回收利用！我们一抗没有回收，但是效价高，每次用都有十几二十毫升。二抗回收，一次20毫升，重复利用，直接用盒子就好了！如果量少，封口膜不好用，小离心管啥的也可以试下！！！ 改进封口技术啊:tiger22: 我用枪头盒的盖子。 不知你所谓的塑料袋是不是专用的杂交袋，那样的话就参考4楼建议，封口机很便宜的，更新吧
不是的话，建议买杂交袋，也不贵，而且可以节省抗体，尤其是一抗 多练几次封口就好了！ 还是用杂交袋好，真省试剂呢 我们也是用的封口袋，一抗可以回收，特别省试剂 我们实验室，孵育一抗用的是小平皿，然后用过之后还能重复利用，洗膜用的是一种小盒子，类似于调料盒，之后在盒中直接孵育二抗，二抗不回收利用，
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